CAJ | 학술논문

以山核桃Carya cathayensis 基因组DNA为模板,对聚合酶链式反应(PCR)体系各组分进行了梯度实验,优化出条带清晰、重复性好的相关序列扩增多态性聚合酶链式反应(SRAP-PCR)扩增体系,并筛选了引物.该体系(25.00μL)为:1×缓冲液0.20 mmol·L-1,脱氧核糖核苷酸(dNTPs),0.20μmol·L-1引物,2.00mmol·L-1镁离子(Mg2+),33.34 nkat Taq DNA聚合酶,0.80 mg·L-1基因组DNA(以上均为终浓度).反应条件为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸2 min,5个循环;94℃变性30 s,50℃退火30 s,72℃延伸2 min,30个循环;72℃延伸8 min,4℃保存,反应时间比其他体系缩短了一半.从100对引物中筛选出了适用于山核桃的引物15对.在山核桃中,随机扩增多态性DNA(RAPD),简单序列重复区间(ISSR),SRAP等3种标记,以SRAP标记每对引物扩增的位点数及每对引物扩增的多态性位点数为多,但SRAP多态性引物的比例、多态性位点比例居于另2种标记之间.在山核桃研究中可以考虑使用SRAP及RAPD标记.
이산핵도Carya cathayensis 기인조DNA위모판,대취합매련식반응(PCR)체계각조분진행료제도실험,우화출조대청석、중복성호적상관서렬확증다태성취합매련식반응(SRAP-PCR)확증체계,병사선료인물.해체계(25.00μL)위:1×완충액0.20 mmol·L-1,탈양핵당핵감산(dNTPs),0.20μmol·L-1인물,2.00mmol·L-1미리자(Mg2+),33.34 nkat Taq DNA취합매,0.80 mg·L-1기인조DNA(이상균위종농도).반응조건위94℃예변성5 min;94℃변성30 s,35℃퇴화30 s,72℃연신2 min,5개순배;94℃변성30 s,50℃퇴화30 s,72℃연신2 min,30개순배;72℃연신8 min,4℃보존,반응시간비기타체계축단료일반.종100대인물중사선출료괄용우산핵도적인물15대.재산핵도중,수궤확증다태성DNA(RAPD),간단서렬중복구간(ISSR),SRAP등3충표기,이SRAP표기매대인물확증적위점수급매대인물확증적다태성위점수위다,단SRAP다태성인물적비례、다태성위점비례거우령2충표기지간.재산핵도연구중가이고필사용SRAP급RAPD표기.