上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2011年
6期
744-747
,共4页
p16基因%克隆%结肠癌细胞%D型细胞周期蛋白%周期蛋白依赖性蛋白激酶4
p16基因%剋隆%結腸癌細胞%D型細胞週期蛋白%週期蛋白依賴性蛋白激酶4
p16기인%극륭%결장암세포%D형세포주기단백%주기단백의뢰성단백격매4
目的 探讨p16基因对结肠癌细胞生长的抑制作用.方法 采用亚克隆技术将p16基因克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,Lipofectamine法将p16基因转染入结肠癌细胞株SW480.采用MTT法检测未转染细胞(SW480组)、转染空质粒细胞(SW480-GFP组)和转染p16细胞(SW480-p16组)培养24、48和72 h后细胞的增殖率；Real-Time PCR和Western blotting分别检测3组细胞的p16、CDK4、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 p16基因克隆人真核表达载体,并成功转染结肠癌细胞后,在基因和蛋白质水平均有外源性p16基因表达,与SW480组比较,相对表达量均有显著增加(P＜0 01).MTT检测结果显示:培养48 h和72 h后,SW480-p16组的细胞相对增殖率均显著低于SW480组和SW480-GFP组(P＜0.01).Real-Time PCR检测结果显示:SW480-p16组的p16 mRNA相对表达量接近SW480-GFP组的2.38倍,接近SW480细胞的2.59倍,差异具有统计学意义(P＜0.01)；SW480-p16组的cyclin D1 mRNA相对表达量明显低于SW480组和SW480-GFP组细胞(P＜0.05),而CDK4mRNA的相对表达量略低于SW480组和SW480-GFP组,差异无统计学意义(P＞0 05).Western blotting检测结果显示:与SW480-GFP组和SW480组比较,SW480-p16组的P16蛋白表达量明显升高；而CDK4和cyclin D1蛋白表达量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 p16基因转染入结肠癌细胞,具有抑制癌细胞生长的功能.
目的 探討p16基因對結腸癌細胞生長的抑製作用.方法 採用亞剋隆技術將p16基因剋隆入真覈錶達載體pEGFP-N3中,Lipofectamine法將p16基因轉染入結腸癌細胞株SW480.採用MTT法檢測未轉染細胞(SW480組)、轉染空質粒細胞(SW480-GFP組)和轉染p16細胞(SW480-p16組)培養24、48和72 h後細胞的增殖率；Real-Time PCR和Western blotting分彆檢測3組細胞的p16、CDK4、cyclin D1 mRNA和蛋白的錶達情況.結果 p16基因剋隆人真覈錶達載體,併成功轉染結腸癌細胞後,在基因和蛋白質水平均有外源性p16基因錶達,與SW480組比較,相對錶達量均有顯著增加(P＜0 01).MTT檢測結果顯示:培養48 h和72 h後,SW480-p16組的細胞相對增殖率均顯著低于SW480組和SW480-GFP組(P＜0.01).Real-Time PCR檢測結果顯示:SW480-p16組的p16 mRNA相對錶達量接近SW480-GFP組的2.38倍,接近SW480細胞的2.59倍,差異具有統計學意義(P＜0.01)；SW480-p16組的cyclin D1 mRNA相對錶達量明顯低于SW480組和SW480-GFP組細胞(P＜0.05),而CDK4mRNA的相對錶達量略低于SW480組和SW480-GFP組,差異無統計學意義(P＞0 05).Western blotting檢測結果顯示:與SW480-GFP組和SW480組比較,SW480-p16組的P16蛋白錶達量明顯升高；而CDK4和cyclin D1蛋白錶達量明顯降低,差異均有統計學意義(P＜0.01).結論 p16基因轉染入結腸癌細胞,具有抑製癌細胞生長的功能.
목적 탐토p16기인대결장암세포생장적억제작용.방법 채용아극륭기술장p16기인극륭입진핵표체재체pEGFP-N3중,Lipofectamine법장p16기인전염입결장암세포주SW480.채용MTT법검측미전염세포(SW480조)、전염공질립세포(SW480-GFP조)화전염p16세포(SW480-p16조)배양24、48화72 h후세포적증식솔；Real-Time PCR화Western blotting분별검측3조세포적p16、CDK4、cyclin D1 mRNA화단백적표체정황.결과 p16기인극륭인진핵표체재체,병성공전염결장암세포후,재기인화단백질수평균유외원성p16기인표체,여SW480조비교,상대표체량균유현저증가(P＜0 01).MTT검측결과현시:배양48 h화72 h후,SW480-p16조적세포상대증식솔균현저저우SW480조화SW480-GFP조(P＜0.01).Real-Time PCR검측결과현시:SW480-p16조적p16 mRNA상대표체량접근SW480-GFP조적2.38배,접근SW480세포적2.59배,차이구유통계학의의(P＜0.01)；SW480-p16조적cyclin D1 mRNA상대표체량명현저우SW480조화SW480-GFP조세포(P＜0.05),이CDK4mRNA적상대표체량략저우SW480조화SW480-GFP조,차이무통계학의의(P＞0 05).Western blotting검측결과현시:여SW480-GFP조화SW480조비교,SW480-p16조적P16단백표체량명현승고；이CDK4화cyclin D1단백표체량명현강저,차이균유통계학의의(P＜0.01).결론 p16기인전염입결장암세포,구유억제암세포생장적공능.
