同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2012年
2期
1-6
,共6页
顾羊林%朱文辉%王予彬%卢亮宇%程晏%李靖龙
顧羊林%硃文輝%王予彬%盧亮宇%程晏%李靖龍
고양림%주문휘%왕여빈%로량우%정안%리정룡
成肌细胞%软骨分化%种子细胞%人源性软骨源性形态发生蛋白-2%软骨组织工程
成肌細胞%軟骨分化%種子細胞%人源性軟骨源性形態髮生蛋白-2%軟骨組織工程
성기세포%연골분화%충자세포%인원성연골원성형태발생단백-2%연골조직공정
目的 观察体外培养的犬成肌细胞在诱导培养液作用下向纤维软骨细胞表型分化的可行性.方法 取成年比格犬大腿后群肌肉,以机械分解法与二步酶消化法相结合,分离获取成肌细胞,取第4代成肌细胞,实验组以2.0×104/cm2细胞密度接种于24孔板,在含有人源性软骨源性形态发生蛋白-2(human cartilage-derived morphogenic protein-2,hCDMP-2)的高糖DMEM完全培养液中诱导分化,对照组以相同细胞密度接种于24孔板,加入不含诱导因子的高糖DMEM完全培养液.诱导21 d后,倒置显微镜下观察诱导细胞形态学的改变,H-E染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学方法检测诱导细胞的分泌功能,RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白和Sox9的mRNA表达情况.结果 诱导后成肌细胞的形态由长梭形向多角形类、圆形转变.甲苯胺蓝染色呈明显异染,Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学检测阳性,对照组阴性.RT-PCR检测显示经诱导后细胞Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白和Sox9的mRNA在对应区域均有目的条带出现,而对照组未见明显的目的条带亮带.结论 在hCDMP-2诱导下,犬成肌细胞可定向分化为软骨细胞.
目的 觀察體外培養的犬成肌細胞在誘導培養液作用下嚮纖維軟骨細胞錶型分化的可行性.方法 取成年比格犬大腿後群肌肉,以機械分解法與二步酶消化法相結閤,分離穫取成肌細胞,取第4代成肌細胞,實驗組以2.0×104/cm2細胞密度接種于24孔闆,在含有人源性軟骨源性形態髮生蛋白-2(human cartilage-derived morphogenic protein-2,hCDMP-2)的高糖DMEM完全培養液中誘導分化,對照組以相同細胞密度接種于24孔闆,加入不含誘導因子的高糖DMEM完全培養液.誘導21 d後,倒置顯微鏡下觀察誘導細胞形態學的改變,H-E染色、甲苯胺藍染色、Ⅱ型膠原蛋白免疫組織化學方法檢測誘導細胞的分泌功能,RT-PCR檢測Ⅰ型、Ⅱ型膠原蛋白和Sox9的mRNA錶達情況.結果 誘導後成肌細胞的形態由長梭形嚮多角形類、圓形轉變.甲苯胺藍染色呈明顯異染,Ⅱ型膠原蛋白免疫細胞化學檢測暘性,對照組陰性.RT-PCR檢測顯示經誘導後細胞Ⅰ型、Ⅱ型膠原蛋白和Sox9的mRNA在對應區域均有目的條帶齣現,而對照組未見明顯的目的條帶亮帶.結論 在hCDMP-2誘導下,犬成肌細胞可定嚮分化為軟骨細胞.
목적 관찰체외배양적견성기세포재유도배양액작용하향섬유연골세포표형분화적가행성.방법 취성년비격견대퇴후군기육,이궤계분해법여이보매소화법상결합,분리획취성기세포,취제4대성기세포,실험조이2.0×104/cm2세포밀도접충우24공판,재함유인원성연골원성형태발생단백-2(human cartilage-derived morphogenic protein-2,hCDMP-2)적고당DMEM완전배양액중유도분화,대조조이상동세포밀도접충우24공판,가입불함유도인자적고당DMEM완전배양액.유도21 d후,도치현미경하관찰유도세포형태학적개변,H-E염색、갑분알람염색、Ⅱ형효원단백면역조직화학방법검측유도세포적분비공능,RT-PCR검측Ⅰ형、Ⅱ형효원단백화Sox9적mRNA표체정황.결과 유도후성기세포적형태유장사형향다각형류、원형전변.갑분알람염색정명현이염,Ⅱ형효원단백면역세포화학검측양성,대조조음성.RT-PCR검측현시경유도후세포Ⅰ형、Ⅱ형효원단백화Sox9적mRNA재대응구역균유목적조대출현,이대조조미견명현적목적조대량대.결론 재hCDMP-2유도하,견성기세포가정향분화위연골세포.
