中国神经免疫学和神经病学杂志
中國神經免疫學和神經病學雜誌
중국신경면역학화신경병학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY AND
2009年
1期
35-38
,共4页
重症肌无力%乙酰胆碱受体%N-末端胞外域%主要免疫原区%mAb35
重癥肌無力%乙酰膽堿受體%N-末耑胞外域%主要免疫原區%mAb35
중증기무력%을선담감수체%N-말단포외역%주요면역원구%mAb35
目的 获得大量正确折叠的重组人乙酰胆碱受体(AChR)αl亚基N末端胞外域(ECD)蛋白.方法 用RT-PCR方法从TE671细胞中扩增出AChR αl亚基全序列,在此基础上再扩增出ECD基因序列并将其插入到原核表达载体pET16b.以构建的新载体转化E.coli BL21(DE3)pLysS,培养物以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过SDS-PAGE比较诱导前后蛋白表达情况.重组蛋白以Ni2+亲和层析纯化.蛋白透析复性后,以ELISA法检测活性.结果 PCR产物大小为650 bp,与预计相符;所构建质粒经测序证实ECD核苷酸序列正确,并正确插入载体pET16b.诱导所产生的大量包涵体蛋白经复性后正确折叠且具活性.结论 可通过原核表达获得大量正确折叠的可溶性重组人肌肉AChR al亚基ECD蛋白.
目的 穫得大量正確摺疊的重組人乙酰膽堿受體(AChR)αl亞基N末耑胞外域(ECD)蛋白.方法 用RT-PCR方法從TE671細胞中擴增齣AChR αl亞基全序列,在此基礎上再擴增齣ECD基因序列併將其插入到原覈錶達載體pET16b.以構建的新載體轉化E.coli BL21(DE3)pLysS,培養物以異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達併通過SDS-PAGE比較誘導前後蛋白錶達情況.重組蛋白以Ni2+親和層析純化.蛋白透析複性後,以ELISA法檢測活性.結果 PCR產物大小為650 bp,與預計相符;所構建質粒經測序證實ECD覈苷痠序列正確,併正確插入載體pET16b.誘導所產生的大量包涵體蛋白經複性後正確摺疊且具活性.結論 可通過原覈錶達穫得大量正確摺疊的可溶性重組人肌肉AChR al亞基ECD蛋白.
목적 획득대량정학절첩적중조인을선담감수체(AChR)αl아기N말단포외역(ECD)단백.방법 용RT-PCR방법종TE671세포중확증출AChR αl아기전서렬,재차기출상재확증출ECD기인서렬병장기삽입도원핵표체재체pET16b.이구건적신재체전화E.coli BL21(DE3)pLysS,배양물이이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체병통과SDS-PAGE비교유도전후단백표체정황.중조단백이Ni2+친화층석순화.단백투석복성후,이ELISA법검측활성.결과 PCR산물대소위650 bp,여예계상부;소구건질립경측서증실ECD핵감산서렬정학,병정학삽입재체pET16b.유도소산생적대량포함체단백경복성후정학절첩차구활성.결론 가통과원핵표체획득대량정학절첩적가용성중조인기육AChR al아기ECD단백.
