中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2009年
8期
712-717
,共6页
曹培丽%李媛%陈超%郭丹%王亮%乔祖建%辛九庆
曹培麗%李媛%陳超%郭丹%王亮%喬祖建%辛九慶
조배려%리원%진초%곽단%왕량%교조건%신구경
猪肺炎霉形体%p52基因%重组腺病毒%免疫应答
豬肺炎黴形體%p52基因%重組腺病毒%免疫應答
저폐염매형체%p52기인%중조선병독%면역응답
为构建携带猪肺炎霉形体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)p52基因的重组腺病毒,从Mhp J株扩增p52基因,克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,经Pine Ⅰ线性化后,电转化入BJ5183菌内,与其含有的骨架载体pAdEasy-1同源重组,再与脂质体混合转染AD-293细胞,包装成完整的腺病毒,经RT-PCR、间接免疫荧光鉴定后扩增,收集病毒液,免疫BALB/c小鼠,并分析了体液免疫、黏膜免疫和细胞免疫效果.结果表明,重组质粒pShuttle-CMV-P52插入片段为1 202 bp;同源重组成功;重组腺病毒可以正确表达目的蛋白,效价达1×106TCID50/mL.重组病毒经肌肉注射和滴鼻均可诱导小鼠产生血清和肺匀浆液特异性IgG、SIgA,但不能诱导特异的淋巴细胞增殖.证实,成功构建了表达p52基因的重组腺病毒,该病毒可诱发小鼠产生特异的体液免疫和黏膜免疫,但不产生细胞免疫应答.
為構建攜帶豬肺炎黴形體(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)p52基因的重組腺病毒,從Mhp J株擴增p52基因,剋隆到穿梭載體pShuttle-CMV中,經Pine Ⅰ線性化後,電轉化入BJ5183菌內,與其含有的骨架載體pAdEasy-1同源重組,再與脂質體混閤轉染AD-293細胞,包裝成完整的腺病毒,經RT-PCR、間接免疫熒光鑒定後擴增,收集病毒液,免疫BALB/c小鼠,併分析瞭體液免疫、黏膜免疫和細胞免疫效果.結果錶明,重組質粒pShuttle-CMV-P52插入片段為1 202 bp;同源重組成功;重組腺病毒可以正確錶達目的蛋白,效價達1×106TCID50/mL.重組病毒經肌肉註射和滴鼻均可誘導小鼠產生血清和肺勻漿液特異性IgG、SIgA,但不能誘導特異的淋巴細胞增殖.證實,成功構建瞭錶達p52基因的重組腺病毒,該病毒可誘髮小鼠產生特異的體液免疫和黏膜免疫,但不產生細胞免疫應答.
위구건휴대저폐염매형체(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)p52기인적중조선병독,종Mhp J주확증p52기인,극륭도천사재체pShuttle-CMV중,경Pine Ⅰ선성화후,전전화입BJ5183균내,여기함유적골가재체pAdEasy-1동원중조,재여지질체혼합전염AD-293세포,포장성완정적선병독,경RT-PCR、간접면역형광감정후확증,수집병독액,면역BALB/c소서,병분석료체액면역、점막면역화세포면역효과.결과표명,중조질립pShuttle-CMV-P52삽입편단위1 202 bp;동원중조성공;중조선병독가이정학표체목적단백,효개체1×106TCID50/mL.중조병독경기육주사화적비균가유도소서산생혈청화폐균장액특이성IgG、SIgA,단불능유도특이적림파세포증식.증실,성공구건료표체p52기인적중조선병독,해병독가유발소서산생특이적체액면역화점막면역,단불산생세포면역응답.
