CAJ | 학술논문

背景:有研究表明骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)异源二聚体比同源二聚体的活性高20倍,但相关BMP 4/7融合基因的相关病毒载体的构建至今少有报道.目的:构建重组人BMP-4/7 融合基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体并检测其表达.方法:扩增BMP-4、7成熟肽基因;分别构建质粒pGEM-BMP-4和pGEM-BMP-7;采用DNA连接法获取BMP-4/7融合基因,克隆获得pGEM-BMP-4/7质粒,进行基因测序.AAV颗粒转染HEK293细胞,收获病毒载体AAV-BMP-4/7.用SDS-PAGE电泳检测BMP-4/7融合基因蛋白在大肠杆菌的表达.用不同感染复数的AAV-BMP-4/7转染骨髓间充质干细胞3 d,提取细胞总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和ELISA法检测融合基因BMP-4/7在骨髓间充质干细胞中的表达.结果与结论:PCR 电泳,酶切鉴定及测序结果表明,装入pSNAV质粒中的BMP-4/7 基因正确,pSNAV-BMP-4/7重组成功.RT-PCR检测到骨髓间充质干细胞BMP-4/7融合基因的转录条带,ELISA检测显示经AAV转染的骨髓间充质干细胞中BMP-4/7蛋白随着感染复数的增加表达逐渐增高(P < 0.01).结果证实,实验成功构建重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体.
배경:유연구표명골형성단백(bone morphogenetic protein,BMP)이원이취체비동원이취체적활성고20배,단상관BMP 4/7융합기인적상관병독재체적구건지금소유보도.목적:구건중조인BMP-4/7 융합기인선상관병독(adeno-associated virus,AAV)재체병검측기표체.방법:확증BMP-4、7성숙태기인;분별구건질립pGEM-BMP-4화pGEM-BMP-7;채용DNA련접법획취BMP-4/7융합기인,극륭획득pGEM-BMP-4/7질립,진행기인측서.AAV과립전염HEK293세포,수획병독재체AAV-BMP-4/7.용SDS-PAGE전영검측BMP-4/7융합기인단백재대장간균적표체.용불동감염복수적AAV-BMP-4/7전염골수간충질간세포3 d,제취세포총RNA화총단백,진행RT-PCR화ELISA법검측융합기인BMP-4/7재골수간충질간세포중적표체.결과여결론:PCR 전영,매절감정급측서결과표명,장입pSNAV질립중적BMP-4/7 기인정학,pSNAV-BMP-4/7중조성공.RT-PCR검측도골수간충질간세포BMP-4/7융합기인적전록조대,ELISA검측현시경AAV전염적골수간충질간세포중BMP-4/7단백수착감염복수적증가표체축점증고(P < 0.01).결과증실,실험성공구건중조골형성단백4/7융합기인선상관병독재체.