中国癌症杂志
中國癌癥雜誌
중국암증잡지
CHINA ONCOLOGY
2000年
1期
27-30
,共4页
蓖麻毒素A链基因%PCR%表达载体pTSA-18F%核糖体失活作用%人肺腺癌细胞SPC
蓖痳毒素A鏈基因%PCR%錶達載體pTSA-18F%覈糖體失活作用%人肺腺癌細胞SPC
비마독소A련기인%PCR%표체재체pTSA-18F%핵당체실활작용%인폐선암세포SPC
目的:研究构建重组单链免疫毒素,对人体肿瘤进行导向治疗.方法:采用PCR方法从克隆化载体中拉出蓖麻毒素A链(ricin A)基因,装入经过改建的pTSA-18F表达载体,进行目的基因DNA序列分析后导人E.coli BL21(DE3)中进行表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检查,表达产物的生物活性通过RNA N-糖苷酶活性检查、无细胞体系中对蛋白质生物合成的抑制以及对肿瘤细胞的毒性作用来分析.结果:SDS-PAGE检查表明,转化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中出现1条Mr约30×103大小、较空载体对照E.coli BL21(DE3)(pTS)明显浓黑的条带;Western blot检查表明,转化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中有杂交条带出现,而E.coli BL21(DE3)(pTS)中没有;表达蓖麻毒素A链蛋白能够特异地作用于大鼠肝28S核糖体RNA,使其产生约450 nt大小的核酸片段;对无细胞体系中蛋白质生物合成的IC50为3.7×10-9mol/L,略高于天然蓖麻毒蛋白;具有与天然蓖麻毒蛋白相近的肿瘤细胞毒性.结论:蓖麻毒素A链基因在转化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中获得表达,表达产物具有与天然蓖麻毒蛋白相近的RNA N-糖苷酶活性,在无细胞体系中对蛋白质生物合成具有抑制作用,对肿瘤细胞SPC具有毒性作用.
目的:研究構建重組單鏈免疫毒素,對人體腫瘤進行導嚮治療.方法:採用PCR方法從剋隆化載體中拉齣蓖痳毒素A鏈(ricin A)基因,裝入經過改建的pTSA-18F錶達載體,進行目的基因DNA序列分析後導人E.coli BL21(DE3)中進行錶達,錶達產物進行SDS-PAGE和Western blot檢查,錶達產物的生物活性通過RNA N-糖苷酶活性檢查、無細胞體繫中對蛋白質生物閤成的抑製以及對腫瘤細胞的毒性作用來分析.結果:SDS-PAGE檢查錶明,轉化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中齣現1條Mr約30×103大小、較空載體對照E.coli BL21(DE3)(pTS)明顯濃黑的條帶;Western blot檢查錶明,轉化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中有雜交條帶齣現,而E.coli BL21(DE3)(pTS)中沒有;錶達蓖痳毒素A鏈蛋白能夠特異地作用于大鼠肝28S覈糖體RNA,使其產生約450 nt大小的覈痠片段;對無細胞體繫中蛋白質生物閤成的IC50為3.7×10-9mol/L,略高于天然蓖痳毒蛋白;具有與天然蓖痳毒蛋白相近的腫瘤細胞毒性.結論:蓖痳毒素A鏈基因在轉化子E.coli BL21(DE3)(pTSRA)中穫得錶達,錶達產物具有與天然蓖痳毒蛋白相近的RNA N-糖苷酶活性,在無細胞體繫中對蛋白質生物閤成具有抑製作用,對腫瘤細胞SPC具有毒性作用.
목적:연구구건중조단련면역독소,대인체종류진행도향치료.방법:채용PCR방법종극륭화재체중랍출비마독소A련(ricin A)기인,장입경과개건적pTSA-18F표체재체,진행목적기인DNA서렬분석후도인E.coli BL21(DE3)중진행표체,표체산물진행SDS-PAGE화Western blot검사,표체산물적생물활성통과RNA N-당감매활성검사、무세포체계중대단백질생물합성적억제이급대종류세포적독성작용래분석.결과:SDS-PAGE검사표명,전화자E.coli BL21(DE3)(pTSRA)중출현1조Mr약30×103대소、교공재체대조E.coli BL21(DE3)(pTS)명현농흑적조대;Western blot검사표명,전화자E.coli BL21(DE3)(pTSRA)중유잡교조대출현,이E.coli BL21(DE3)(pTS)중몰유;표체비마독소A련단백능구특이지작용우대서간28S핵당체RNA,사기산생약450 nt대소적핵산편단;대무세포체계중단백질생물합성적IC50위3.7×10-9mol/L,략고우천연비마독단백;구유여천연비마독단백상근적종류세포독성.결론:비마독소A련기인재전화자E.coli BL21(DE3)(pTSRA)중획득표체,표체산물구유여천연비마독단백상근적RNA N-당감매활성,재무세포체계중대단백질생물합성구유억제작용,대종류세포SPC구유독성작용.
