CAJ | 학술논문

目的:为了基因治疗研究的需要构建人白细胞介素12(hIL-12)双亚基基因共表达质粒[(P(+)/IL-12)],比较它与单个亚基基因表达质粒[P(+)/P40和P(-)/P35]1∶1共同转染肝癌细胞HepG2后48小时表达结果.方法:分别克隆hIL-12 P40、P35亚基cDNA全长至pcDNA3.1(±)中构建P(+)/P40和P(-)/P35,再将两者串联克隆至pcDNA3.1(+)中构建P(+)/IL-12.脂质体转染3种质粒至肝癌细胞HepG2,48小时后抽取细胞总RNA做半定量RT-PCR,同时取细胞上清做ELISA及Western杂交,结果进行比较分析.结果:两种转染方式均可以表达hIL-12蛋白质且半定量RT-PCR显示较未转染组hIL-12的mRNA水平均增加;转染后48小时P(+)/IL-12组细胞培养上清hIL-12表达量较[P(+)/P40和P(-)/P35]按1∶1比例共同转染组显著增高(P＜0.05).结论:人白细胞介素12双亚基基因串联共表达质粒[P(+)/IL-12]能够转入HepG2并表达hIL-12蛋白质,并且转染后48小时hIL-12表达量较单个亚基基因表达质粒[P(+)/P40、P(-)/P35]1∶1共转染者显著高.
목적:위료기인치료연구적수요구건인백세포개소12(hIL-12)쌍아기기인공표체질립[(P(+)/IL-12)],비교타여단개아기기인표체질립[P(+)/P40화P(-)/P35]1∶1공동전염간암세포HepG2후48소시표체결과.방법:분별극륭hIL-12 P40、P35아기cDNA전장지pcDNA3.1(±)중구건P(+)/P40화P(-)/P35,재장량자천련극륭지pcDNA3.1(+)중구건P(+)/IL-12.지질체전염3충질립지간암세포HepG2,48소시후추취세포총RNA주반정량RT-PCR,동시취세포상청주ELISA급Western잡교,결과진행비교분석.결과:량충전염방식균가이표체hIL-12단백질차반정량RT-PCR현시교미전염조hIL-12적mRNA수평균증가;전염후48소시P(+)/IL-12조세포배양상청hIL-12표체량교[P(+)/P40화P(-)/P35]안1∶1비례공동전염조현저증고(P＜0.05).결론:인백세포개소12쌍아기기인천련공표체질립[P(+)/IL-12]능구전입HepG2병표체hIL-12단백질,병차전염후48소시hIL-12표체량교단개아기기인표체질립[P(+)/P40、P(-)/P35]1∶1공전염자현저고.