CAJ | 학술논문

为进一步研究EB病毒核抗原1(EBNA1)的功能及提高EB病毒(EBV)相关疾病辅助诊断的特异性,对EBNA1基因3′端的部分片段进行了原核表达、纯化并初步研究其免疫学特性.采用PCR法扩增了EBNA1基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其3′端573 bp片段克隆至原核表达载体pET20a中,得到重组质粒pET30a-SS580.该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出分子量约25 kD的融合蛋白(25-kDEBNA1).该蛋白以包涵体和可溶形式存在,均可用Ni2+离子亲和柱纯化.Western印迹结果显示,该蛋白能与鼻咽癌(NPC)病人血清发生特异性反应.纯化的25 kD EBNA1蛋白免疫BALB/c小鼠后,经ELISA检测获得了高效价的多克隆抗体.免疫印迹和间接免疫荧光结果显示制备的免疫小鼠血清能够与HeLa细胞中瞬时表达的EBNA1蛋白发生特异性反应,且特异性优于鼻咽癌病人血清.以上结果表明成功构建了EBNA1羧基端的原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了25 kD EBNA1蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性.
위진일보연구EB병독핵항원1(EBNA1)적공능급제고EB병독(EBV)상관질병보조진단적특이성,대EBNA1기인3′단적부분편단진행료원핵표체、순화병초보연구기면역학특성.채용PCR법확증료EBNA1기인편마구,경매절감정、서렬분석후,장기3′단573 bp편단극륭지원핵표체재체pET20a중,득도중조질립pET30a-SS580.해중조질립전화대장간균BL21(DE3)감수태세포병경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체출분자량약25 kD적융합단백(25-kDEBNA1).해단백이포함체화가용형식존재,균가용Ni2+리자친화주순화.Western인적결과현시,해단백능여비인암(NPC)병인혈청발생특이성반응.순화적25 kD EBNA1단백면역BALB/c소서후,경ELISA검측획득료고효개적다극륭항체.면역인적화간접면역형광결과현시제비적면역소서혈청능구여HeLa세포중순시표체적EBNA1단백발생특이성반응,차특이성우우비인암병인혈청.이상결과표명성공구건료EBNA1최기단적원핵표체질립,병재대장간균중고효표체료25 kD EBNA1단백,해단백구유량호적항원성화면역원성.