华西药学杂志
華西藥學雜誌
화서약학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES
2007年
1期
22-24
,共3页
查晓军%王鹏%李保国%王健琪%翟朝阳
查曉軍%王鵬%李保國%王健琪%翟朝暘
사효군%왕붕%리보국%왕건기%적조양
人纤溶酶原K5%Kringle5%RGD序列%融合表达%血管增生抑制剂
人纖溶酶原K5%Kringle5%RGD序列%融閤錶達%血管增生抑製劑
인섬용매원K5%Kringle5%RGD서렬%융합표체%혈관증생억제제
目的 改造人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因,构建RGDRGD-liteK5融合表达质粒,并表达纯化所得RGDRGD-liteK5蛋白.方法 以入纤溶酶原K5 cDNA为模板,通过PCR得到RGDRGD-liteK5基因片段,并克隆到质粒pGEXl-λT中,构建重组原核融合表达载体pGEX-RGDRGD-liteK5;在IPTG诱导下,观察融合蛋白在大肠杆菌Rosetta中的表达情况;利用亲合层析柱纯化表达产物,用Western blot分析鉴定表达产物.结果 PCR扩增得到274 bp的片段,并成功插入pGEX1-λT质粒;含重组质粒的大肠杆菌在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,其分子量为36 kD;获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量约为10 kD的RGDRGD-liteK5蛋白;Western blot证实了表达产物的正确性.结论 成功地改造了人纤溶酶原K5基因,构建了重组融合表达质粒pGEX-RGDRGD-liteK5,并纯化了其表达产物.
目的 改造人纖溶酶原Kringle 5(K5)基因,構建RGDRGD-liteK5融閤錶達質粒,併錶達純化所得RGDRGD-liteK5蛋白.方法 以入纖溶酶原K5 cDNA為模闆,通過PCR得到RGDRGD-liteK5基因片段,併剋隆到質粒pGEXl-λT中,構建重組原覈融閤錶達載體pGEX-RGDRGD-liteK5;在IPTG誘導下,觀察融閤蛋白在大腸桿菌Rosetta中的錶達情況;利用親閤層析柱純化錶達產物,用Western blot分析鑒定錶達產物.結果 PCR擴增得到274 bp的片段,併成功插入pGEX1-λT質粒;含重組質粒的大腸桿菌在IPTG誘導下錶達瞭特異性的融閤蛋白,其分子量為36 kD;穫得的融閤蛋白經凝血酶酶切後,得到瞭分子量約為10 kD的RGDRGD-liteK5蛋白;Western blot證實瞭錶達產物的正確性.結論 成功地改造瞭人纖溶酶原K5基因,構建瞭重組融閤錶達質粒pGEX-RGDRGD-liteK5,併純化瞭其錶達產物.
목적 개조인섬용매원Kringle 5(K5)기인,구건RGDRGD-liteK5융합표체질립,병표체순화소득RGDRGD-liteK5단백.방법 이입섬용매원K5 cDNA위모판,통과PCR득도RGDRGD-liteK5기인편단,병극륭도질립pGEXl-λT중,구건중조원핵융합표체재체pGEX-RGDRGD-liteK5;재IPTG유도하,관찰융합단백재대장간균Rosetta중적표체정황;이용친합층석주순화표체산물,용Western blot분석감정표체산물.결과 PCR확증득도274 bp적편단,병성공삽입pGEX1-λT질립;함중조질립적대장간균재IPTG유도하표체료특이성적융합단백,기분자량위36 kD;획득적융합단백경응혈매매절후,득도료분자량약위10 kD적RGDRGD-liteK5단백;Western blot증실료표체산물적정학성.결론 성공지개조료인섬용매원K5기인,구건료중조융합표체질립pGEX-RGDRGD-liteK5,병순화료기표체산물.
