中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
2期
128-132
,共5页
杨俊%周金林%周望平%玄学南%肖兵南%邱美珍
楊俊%週金林%週望平%玄學南%肖兵南%邱美珍
양준%주금림%주망평%현학남%초병남%구미진
吉布森巴贝虫%顶膜抗原-1%原核表达
吉佈森巴貝蟲%頂膜抗原-1%原覈錶達
길포삼파패충%정막항원-1%원핵표체
通过免疫筛选法,从构建的犬吉布森巴贝虫cDNA基因表达文库中筛选到1个cDNA克隆,此eDNA核苷酸全长2 108 bp,包含1个完整的开放阅读框,编码蛋白的分子质量约为62 ku.经过分析,此蛋白(BgAMA-1)与其他巴贝虫属的顶膜抗原-1具有较高的同源性.为了研究其生物学活性,以此eDNA为模板,利用PCR扩增BgAMA-1的全基因,并将其克隆到pGEX-4T-3载体上,构建了原核表达载体pGEX-4T-3/BgAMA-1.通过Western-blotting对表达并纯化的重组蛋白的生物学活性进行分析.结果显示,构建的pGEX-4T-3/BgAMA-1能在大肠杆茵DH5a中表达,所获的重组抗原BgAMA-1在Western-blotting 上仅与吉布森巴贝虫感染犬血清发生反应,证实其具有种特异性,在诊断方面可能有一定的应用价值.
通過免疫篩選法,從構建的犬吉佈森巴貝蟲cDNA基因錶達文庫中篩選到1箇cDNA剋隆,此eDNA覈苷痠全長2 108 bp,包含1箇完整的開放閱讀框,編碼蛋白的分子質量約為62 ku.經過分析,此蛋白(BgAMA-1)與其他巴貝蟲屬的頂膜抗原-1具有較高的同源性.為瞭研究其生物學活性,以此eDNA為模闆,利用PCR擴增BgAMA-1的全基因,併將其剋隆到pGEX-4T-3載體上,構建瞭原覈錶達載體pGEX-4T-3/BgAMA-1.通過Western-blotting對錶達併純化的重組蛋白的生物學活性進行分析.結果顯示,構建的pGEX-4T-3/BgAMA-1能在大腸桿茵DH5a中錶達,所穫的重組抗原BgAMA-1在Western-blotting 上僅與吉佈森巴貝蟲感染犬血清髮生反應,證實其具有種特異性,在診斷方麵可能有一定的應用價值.
통과면역사선법,종구건적견길포삼파패충cDNA기인표체문고중사선도1개cDNA극륭,차eDNA핵감산전장2 108 bp,포함1개완정적개방열독광,편마단백적분자질량약위62 ku.경과분석,차단백(BgAMA-1)여기타파패충속적정막항원-1구유교고적동원성.위료연구기생물학활성,이차eDNA위모판,이용PCR확증BgAMA-1적전기인,병장기극륭도pGEX-4T-3재체상,구건료원핵표체재체pGEX-4T-3/BgAMA-1.통과Western-blotting대표체병순화적중조단백적생물학활성진행분석.결과현시,구건적pGEX-4T-3/BgAMA-1능재대장간인DH5a중표체,소획적중조항원BgAMA-1재Western-blotting 상부여길포삼파패충감염견혈청발생반응,증실기구유충특이성,재진단방면가능유일정적응용개치.
