重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2011年
9期
1069-1072
,共4页
凋亡抑制因子6%原核表达%融合蛋白
凋亡抑製因子6%原覈錶達%融閤蛋白
조망억제인자6%원핵표체%융합단백
目的:本研究拟采用蛋白原核表达的方法,诱导表达人Api6(Apoptosis inhibitor 6)融合蛋白,为进一步研究Api6在凋亡抑制、脂质代谢和肿瘤发生中的作用奠定基础.方法:利用PCR技术扩增人Api6基因,将其克隆至原核表达载体ppSUMO,构建重组质粒ppSUMO-Api6;重组质粒转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态;采用蛋白原核表达的方法,不同诱导前菌液浓度,不同温度、不同异丙基硫化半乳糖苷(Isopropy 1-β-D-thiogalaotopyrano-side,IPTG)浓度、不同诱导时间,筛选诱导表达Api6重组蛋白的最优条件;Western blot鉴定其表达情况.结果:成功构建重组质粒ppSUMO-Api6;成功诱导Api6重组蛋白的原核表达,表达的最优条件为:OD600=0.5～0.8的重组菌,16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h.结论:含有人Api6 cDNA全长序列的重组质粒ppSUMO-Api6,经转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态细胞,在诱导前菌液OD600=0.5～0.8、16℃、0.5 mmol/LIPTG、诱导16h这一优化的诱导条件下,重组菌ppSUMO-Api6-Rosetta可诱导重组蛋白ppSUMO-Api6的原核表达.
目的:本研究擬採用蛋白原覈錶達的方法,誘導錶達人Api6(Apoptosis inhibitor 6)融閤蛋白,為進一步研究Api6在凋亡抑製、脂質代謝和腫瘤髮生中的作用奠定基礎.方法:利用PCR技術擴增人Api6基因,將其剋隆至原覈錶達載體ppSUMO,構建重組質粒ppSUMO-Api6;重組質粒轉化原覈錶達宿主菌E.coli Rosetta感受態;採用蛋白原覈錶達的方法,不同誘導前菌液濃度,不同溫度、不同異丙基硫化半乳糖苷(Isopropy 1-β-D-thiogalaotopyrano-side,IPTG)濃度、不同誘導時間,篩選誘導錶達Api6重組蛋白的最優條件;Western blot鑒定其錶達情況.結果:成功構建重組質粒ppSUMO-Api6;成功誘導Api6重組蛋白的原覈錶達,錶達的最優條件為:OD600=0.5～0.8的重組菌,16℃、0.5 mmol/L IPTG誘導16 h.結論:含有人Api6 cDNA全長序列的重組質粒ppSUMO-Api6,經轉化原覈錶達宿主菌E.coli Rosetta感受態細胞,在誘導前菌液OD600=0.5～0.8、16℃、0.5 mmol/LIPTG、誘導16h這一優化的誘導條件下,重組菌ppSUMO-Api6-Rosetta可誘導重組蛋白ppSUMO-Api6的原覈錶達.
목적:본연구의채용단백원핵표체적방법,유도표체인Api6(Apoptosis inhibitor 6)융합단백,위진일보연구Api6재조망억제、지질대사화종류발생중적작용전정기출.방법:이용PCR기술확증인Api6기인,장기극륭지원핵표체재체ppSUMO,구건중조질립ppSUMO-Api6;중조질립전화원핵표체숙주균E.coli Rosetta감수태;채용단백원핵표체적방법,불동유도전균액농도,불동온도、불동이병기류화반유당감(Isopropy 1-β-D-thiogalaotopyrano-side,IPTG)농도、불동유도시간,사선유도표체Api6중조단백적최우조건;Western blot감정기표체정황.결과:성공구건중조질립ppSUMO-Api6;성공유도Api6중조단백적원핵표체,표체적최우조건위:OD600=0.5～0.8적중조균,16℃、0.5 mmol/L IPTG유도16 h.결론:함유인Api6 cDNA전장서렬적중조질립ppSUMO-Api6,경전화원핵표체숙주균E.coli Rosetta감수태세포,재유도전균액OD600=0.5～0.8、16℃、0.5 mmol/LIPTG、유도16h저일우화적유도조건하,중조균ppSUMO-Api6-Rosetta가유도중조단백ppSUMO-Api6적원핵표체.
