畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
9期
1309-1315
,共7页
蔺利娟%韩宗玺%邵昱昊%张可心%刘胜旺%李子瑞%马得莹
藺利娟%韓宗璽%邵昱昊%張可心%劉勝旺%李子瑞%馬得瑩
린리연%한종새%소욱호%장가심%류성왕%리자서%마득형
鸭%AvBD4%重组蛋白%抗菌活性%组织分布
鴨%AvBD4%重組蛋白%抗菌活性%組織分佈
압%AvBD4%중조단백%항균활성%조직분포
本研究旨在克隆与表达鸭β防御素4(AvBD4)基因及测定其生物学特性,并检测其在鸭脏器组织中的分布.采用RT-PCR方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭AvBD4,其cDNA大小为171 bp,编码56个氨基酸.经同源性分析,鸭AvBD4与鸡AvBD4的氨基酸序列同源性最高,达73.2％.将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-duck AvBD4.将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃进行诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鸭AvBD4蛋白的相对分子质量约为32 ku,与预期大小一致.该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性,结果显示,重组鸭AvBD4蛋白具有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用.在高盐离子条件下,重组鸭AvBD4蛋白仍具有抑制金黄色葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌的作用.此外,该重组蛋白的溶血活性极低.运用实时荧光定量PCR法检测到该基因在鸭组织器官中表达局限,仅在盲肠扁桃体、脾脏和法氏囊中表达.
本研究旨在剋隆與錶達鴨β防禦素4(AvBD4)基因及測定其生物學特性,併檢測其在鴨髒器組織中的分佈.採用RT-PCR方法從鴨法氏囊組織中擴增到鴨AvBD4,其cDNA大小為171 bp,編碼56箇氨基痠.經同源性分析,鴨AvBD4與鷄AvBD4的氨基痠序列同源性最高,達73.2％.將該基因亞剋隆到原覈錶達載體pGEX-6p-1的EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ雙酶切位點上,構建重組錶達質粒pGEX-duck AvBD4.將重組質粒轉化大腸桿菌BL21,于37℃進行誘導錶達,SDS-PAGE電泳錶明,重組鴨AvBD4蛋白的相對分子質量約為32 ku,與預期大小一緻.該重組蛋白經純化後測定其體外抗菌活性與理化特性,結果顯示,重組鴨AvBD4蛋白具有廣譜的抗菌活性,對11種革蘭氏暘性菌和革蘭氏陰性菌均具有抑菌作用.在高鹽離子條件下,重組鴨AvBD4蛋白仍具有抑製金黃色葡萄毬菌和多殺性巴氏桿菌的作用.此外,該重組蛋白的溶血活性極低.運用實時熒光定量PCR法檢測到該基因在鴨組織器官中錶達跼限,僅在盲腸扁桃體、脾髒和法氏囊中錶達.
본연구지재극륭여표체압β방어소4(AvBD4)기인급측정기생물학특성,병검측기재압장기조직중적분포.채용RT-PCR방법종압법씨낭조직중확증도압AvBD4,기cDNA대소위171 bp,편마56개안기산.경동원성분석,압AvBD4여계AvBD4적안기산서렬동원성최고,체73.2％.장해기인아극륭도원핵표체재체pGEX-6p-1적EcoR Ⅰ화Sal Ⅰ쌍매절위점상,구건중조표체질립pGEX-duck AvBD4.장중조질립전화대장간균BL21,우37℃진행유도표체,SDS-PAGE전영표명,중조압AvBD4단백적상대분자질량약위32 ku,여예기대소일치.해중조단백경순화후측정기체외항균활성여이화특성,결과현시,중조압AvBD4단백구유엄보적항균활성,대11충혁란씨양성균화혁란씨음성균균구유억균작용.재고염리자조건하,중조압AvBD4단백잉구유억제금황색포도구균화다살성파씨간균적작용.차외,해중조단백적용혈활성겁저.운용실시형광정량PCR법검측도해기인재압조직기관중표체국한,부재맹장편도체、비장화법씨낭중표체.
