CAJ | 학술논문

目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达.方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆菌BJ5183,通过同源重组产生腺病毒载体质粒.PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞,包装出重组病毒载体.用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞,并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况.结果经测序、酶切及聚合酶链反应(PCR)鉴定,表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA,并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中,进而组装出腺病毒表达载体.经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs,并有效表达HBD2.结论本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体,并证实其可在dMSCs中表达.
목적구건화감정인β방어소2(HBD2)적중조선병독표체재체,병관찰기전염대서진피다능간세포(dMSCs)후적표체.방법반전록취합매련반응(RT-PCR)확증HBD2전장cDNA,아극륭지천사질립(pAdTrack-CMV)중,연후전화함골가질립(pAdEasy-1)적대장간균BJ5183,통과동원중조산생선병독재체질립.PacⅠ매절양성적중조질립후전염293세포,포장출중조병독재체.용소득중조선병독감염dMSCs세포,병채용RT-PCR화형광면역조직화학검측기재dMSCs중적표체정황.결과경측서、매절급취합매련반응(PCR)감정,표명이성공지확증도HBD2전장cDNA,병장기순서극륭도천사질립화골가질립중,진이조장출선병독표체재체.경RT-PCR화면역조직화학증실구건적병독재체가감염dMSCs,병유효표체HBD2.결론본실험성공지구건료함HBD2기인적선병독표체재체,병증실기가재dMSCs중표체.