细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2007年
1期
86-90
,共5页
王桂玲%周颖%赵大林%李家滨%刘芙蓉%李丰
王桂玲%週穎%趙大林%李傢濱%劉芙蓉%李豐
왕계령%주영%조대림%리가빈%류부용%리봉
PAK1%基因克隆%蛋白表达%转染%绿色荧光蛋白
PAK1%基因剋隆%蛋白錶達%轉染%綠色熒光蛋白
PAK1%기인극륭%단백표체%전염%록색형광단백
为检测人PAK1在原核细胞中的表达情况及在真核细胞中的定位,利用RT-PCR技术获得PAK1目的基因,构建GST融合蛋白原核表达载体pGEX-5X-1/PAK1,IPTG诱导后进行SDS-PAGE及Western印迹检测,并用体外激酶实验测定其生物学活性;同时,构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的真核表达载体pEGFP/PAK1,利用脂质体法转入人胃癌BGC-823细胞系中,在共焦激光扫描显微镜下观察癌细胞中绿色荧光蛋白的表达.结果表明,pGEX-5X-1/PAK1载体能在大肠杆菌BL-21中正确表达GST-PAK1融合蛋白,大小约为94 kDa,具有生物活性;PAK1绿色荧光蛋白定位于细胞浆.上述研究为进一步探索PAK1的生物学特性及信号转导通路打下了基础.
為檢測人PAK1在原覈細胞中的錶達情況及在真覈細胞中的定位,利用RT-PCR技術穫得PAK1目的基因,構建GST融閤蛋白原覈錶達載體pGEX-5X-1/PAK1,IPTG誘導後進行SDS-PAGE及Western印跡檢測,併用體外激酶實驗測定其生物學活性;同時,構建帶綠色熒光蛋白(GFP)標籤的真覈錶達載體pEGFP/PAK1,利用脂質體法轉入人胃癌BGC-823細胞繫中,在共焦激光掃描顯微鏡下觀察癌細胞中綠色熒光蛋白的錶達.結果錶明,pGEX-5X-1/PAK1載體能在大腸桿菌BL-21中正確錶達GST-PAK1融閤蛋白,大小約為94 kDa,具有生物活性;PAK1綠色熒光蛋白定位于細胞漿.上述研究為進一步探索PAK1的生物學特性及信號轉導通路打下瞭基礎.
위검측인PAK1재원핵세포중적표체정황급재진핵세포중적정위,이용RT-PCR기술획득PAK1목적기인,구건GST융합단백원핵표체재체pGEX-5X-1/PAK1,IPTG유도후진행SDS-PAGE급Western인적검측,병용체외격매실험측정기생물학활성;동시,구건대록색형광단백(GFP)표첨적진핵표체재체pEGFP/PAK1,이용지질체법전입인위암BGC-823세포계중,재공초격광소묘현미경하관찰암세포중록색형광단백적표체.결과표명,pGEX-5X-1/PAK1재체능재대장간균BL-21중정학표체GST-PAK1융합단백,대소약위94 kDa,구유생물활성;PAK1록색형광단백정위우세포장.상술연구위진일보탐색PAK1적생물학특성급신호전도통로타하료기출.
