昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2008年
4期
357-364
,共8页
关桦楠%迟德富%宇佳%李晓灿
關樺楠%遲德富%宇佳%李曉燦
관화남%지덕부%우가%리효찬
青杨脊虎天牛%细胞色素P450酶系%CYP4G2基因%克隆%表达
青楊脊虎天牛%細胞色素P450酶繫%CYP4G2基因%剋隆%錶達
청양척호천우%세포색소P450매계%CYP4G2기인%극륭%표체
根据报道的十几种昆虫CYP4家族基因的氨基酸序列保守区域设计一对引物.利用RT-PCR技术扩增编码青杨脊虎天牛Xylotechus rusticus中肠细胞色素氧化酶CYP4G2蛋白的cDNA片段,构建原核表达载体pET-CYP4G2,将其转化人大肠杆菌Escherichia coli JMl09中表达.序列分析结果表明,该基因(CYP4G2,GenBank登录号为EF429250)保守区域阅读框全长387 bp,编码129个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为16.9 kD和5.75;推导的氨基酸序列与已报道的昆虫CYP4家族氮基酸序列一致性较高(63%-86%),且具有细胞色素氧化酶的典型特征.IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测到一条22 kD大小的外源蛋白,与预测融合蛋白的分子量大小相应.CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的pET-CYP4G2.
根據報道的十幾種昆蟲CYP4傢族基因的氨基痠序列保守區域設計一對引物.利用RT-PCR技術擴增編碼青楊脊虎天牛Xylotechus rusticus中腸細胞色素氧化酶CYP4G2蛋白的cDNA片段,構建原覈錶達載體pET-CYP4G2,將其轉化人大腸桿菌Escherichia coli JMl09中錶達.序列分析結果錶明,該基因(CYP4G2,GenBank登錄號為EF429250)保守區域閱讀框全長387 bp,編碼129箇氨基痠殘基,預測分子量和等電點分彆為16.9 kD和5.75;推導的氨基痠序列與已報道的昆蟲CYP4傢族氮基痠序列一緻性較高(63%-86%),且具有細胞色素氧化酶的典型特徵.IPTG誘導後,SDS-PAGE電泳檢測到一條22 kD大小的外源蛋白,與預測融閤蛋白的分子量大小相應.CO差光譜分析證明重組菌錶達瞭有活性的pET-CYP4G2.
근거보도적십궤충곤충CYP4가족기인적안기산서렬보수구역설계일대인물.이용RT-PCR기술확증편마청양척호천우Xylotechus rusticus중장세포색소양화매CYP4G2단백적cDNA편단,구건원핵표체재체pET-CYP4G2,장기전화인대장간균Escherichia coli JMl09중표체.서렬분석결과표명,해기인(CYP4G2,GenBank등록호위EF429250)보수구역열독광전장387 bp,편마129개안기산잔기,예측분자량화등전점분별위16.9 kD화5.75;추도적안기산서렬여이보도적곤충CYP4가족담기산서렬일치성교고(63%-86%),차구유세포색소양화매적전형특정.IPTG유도후,SDS-PAGE전영검측도일조22 kD대소적외원단백,여예측융합단백적분자량대소상응.CO차광보분석증명중조균표체료유활성적pET-CYP4G2.
