上海医学
上海醫學
상해의학
SHANGHAI MEDICAL JOURNAL
2008年
10期
739-742,封底
,共5页
李晓华%郑升%刘优萍%骆天红%罗敏
李曉華%鄭升%劉優萍%駱天紅%囉敏
리효화%정승%류우평%락천홍%라민
蛋白My027%融合蛋白%原核表达
蛋白My027%融閤蛋白%原覈錶達
단백My027%융합단백%원핵표체
目的 探索My027蛋白的体外表达,通过原核表达获得大量可溶性My027融合蛋白. 方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-My027.转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法获得融合蛋白,采用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)、Western印迹法及质谱进行鉴定. 结果 融合蛋白以水溶形式分泌于大肠杆菌BL-21胞质中,纯化后的目的蛋白经SDS-PAGE、Western印迹法及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确. 结论 人脂肪细胞新蛋白My027在pGEX-4T-2原核表达载体可获高效表达,为进一步研究其功能奠定基础.
目的 探索My027蛋白的體外錶達,通過原覈錶達穫得大量可溶性My027融閤蛋白. 方法 逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法擴增齣My027片段,插入原覈錶達載體pGEX-4T-2,構建質粒pGEX-My027.轉化BL-21菌,IPTG低溫誘導錶達融閤蛋白,親和層析法穫得融閤蛋白,採用十二烷基硫痠鈉(SDS)-聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)、Western印跡法及質譜進行鑒定. 結果 融閤蛋白以水溶形式分泌于大腸桿菌BL-21胞質中,純化後的目的蛋白經SDS-PAGE、Western印跡法及質譜證實高效錶達,氨基痠序列正確. 結論 人脂肪細胞新蛋白My027在pGEX-4T-2原覈錶達載體可穫高效錶達,為進一步研究其功能奠定基礎.
목적 탐색My027단백적체외표체,통과원핵표체획득대량가용성My027융합단백. 방법 역전록-취합매련반응(RT-PCR)법확증출My027편단,삽입원핵표체재체pGEX-4T-2,구건질립pGEX-My027.전화BL-21균,IPTG저온유도표체융합단백,친화층석법획득융합단백,채용십이완기류산납(SDS)-취병희선알응효(PAGE)、Western인적법급질보진행감정. 결과 융합단백이수용형식분비우대장간균BL-21포질중,순화후적목적단백경SDS-PAGE、Western인적법급질보증실고효표체,안기산서렬정학. 결론 인지방세포신단백My027재pGEX-4T-2원핵표체재체가획고효표체,위진일보연구기공능전정기출.
