CAJ | 학술논문

[目的]探讨不同的代谢活化系统在人细胞转化模型中潜在的应用价值.[方法]在永生化人肝细胞L02中导入第12密码子突变的H-RAS癌基因(L02-R细胞),使其处于恶性转化前的易感状态.选择具有代表性的间接致癌物黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)作用于永生化和转化前期细胞株,采用三种代谢系统:高表达代谢酶P450 CYP1A2,低剂量底物诱导和加入经典的大鼠S9代谢辅助系统,通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,间接致癌物诱导细胞转化的效能.[结果]蛋白印迹验证H-Ras稳定高表达的转基因细胞株构建成功.通过Ames试验,蛋白印记和CYP1A2酶活性等方法比较三种代谢系统酶活性.在未加代谢系统的条件下,经AFB1染毒后第17周L02-R细胞发生转化.而对照组细胞L02-V在染毒20周未能发生转化.而加入S9代谢系统时,AFB1诱导L02-R细胞在第8周发生转化,比未加代谢系统缩短了9周;经低剂量0.1 μmol/L AFB.诱导和高表达CYP1A2均使L02-R的转化间期缩短6周,于第11周发生转化.[结论]三种代谢系统都能够促进间接致癌物AFB1的代谢活化,缩短细胞转化的时间,提高细胞转化效率.与传统的S9代谢活化系统相比.低剂量诱导作为新的代谢活化的方法在细胞转化试验中有着良好的应用前景.
[목적]탐토불동적대사활화계통재인세포전화모형중잠재적응용개치.[방법]재영생화인간세포L02중도입제12밀마자돌변적H-RAS암기인(L02-R세포),사기처우악성전화전적역감상태.선택구유대표성적간접치암물황곡매독소B1(aflatoxin B1,AFB1)작용우영생화화전화전기세포주,채용삼충대사계통:고표체대사매P450 CYP1A2,저제량저물유도화가입경전적대서S9대사보조계통,통과연경지극륭형성시험화라서피하성류시험래비교재불동적대사활화계통하,간접치암물유도세포전화적효능.[결과]단백인적험증H-Ras은정고표체적전기인세포주구건성공.통과Ames시험,단백인기화CYP1A2매활성등방법비교삼충대사계통매활성.재미가대사계통적조건하,경AFB1염독후제17주L02-R세포발생전화.이대조조세포L02-V재염독20주미능발생전화.이가입S9대사계통시,AFB1유도L02-R세포재제8주발생전화,비미가대사계통축단료9주;경저제량0.1 μmol/L AFB.유도화고표체CYP1A2균사L02-R적전화간기축단6주,우제11주발생전화.[결론]삼충대사계통도능구촉진간접치암물AFB1적대사활화,축단세포전화적시간,제고세포전화효솔.여전통적S9대사활화계통상비.저제량유도작위신적대사활화적방법재세포전화시험중유착량호적응용전경.