中国中西医结合杂志
中國中西醫結閤雜誌
중국중서의결합잡지
CHINESE JOURNAL OF INTEGRATED TRADITIONAL AND WESTERN MEDICINE
2009年
5期
430-434
,共5页
欧明娥%唐利文%李花%邓常清
歐明娥%唐利文%李花%鄧常清
구명아%당리문%리화%산상청
补阳还五汤%血管内皮细胞%黏附分子%信号转导
補暘還五湯%血管內皮細胞%黏附分子%信號轉導
보양환오탕%혈관내피세포%점부분자%신호전도
目的 研究补阳还五汤有效组分生物碱、苷对凝血酶刺激的血管内皮细胞株黏附分子表达的影响及其信号转导机制.方法 (1)体外培养脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞,以凝血酶(Thr)刺激,加入原方、生物碱、苷后培养,免疫细胞化学法检测黏附分子PECAM-1(CD31)、ICAM-1(CD54)、E-selectin和PKCα的表达;(2)培养的ECV-304细胞,分别给予Thr、Thr+H7[1-(5-异喹啉磺酰基)-2-甲基哌嗪]、PMA(佛波脂)、PMA+H7、Thr+CATG(组织蛋白酶-G)、Thr+原方、Thr+生物碱、Thr+苷,免疫细胞化学法检测细胞蛋白激酶Cα(protein kinase C α,PKCα)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal regulated kinase,p-ERK)和核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)表达的变化.结果 (1)凝血酶刺激后黏附分子PECAM-1、ICAM-1和E-selectin增强(P<0.05).与凝血酶组比较,原方组这3种黏附分子表达降低(P<0.05);生物碱组和苷组PECAM-1、ICAM-1表达降低(P<0.05), E-selectin表达无显著变化;(2)凝血酶可促进ECV-304细胞PKCα的表达(P<0.01).PKC激活剂PMA刺激细胞后,PKCα表达增强(P<0.01);PKC抑制剂H7作用于PMA刺激的ECV-304细胞后,PKCα表达被抑制;PAR-1抑制剂CATG作用于凝血酶刺激的细胞后,PKCα表达被显著抑制(P<0.05).原方(50、100 mg/mL)、生物碱(2 mg/mL)和苷(1.25、2.5、5 mg/mL)均可显著抑制凝血酶诱导的PKCα表达(P<0.05);(3)凝血酶刺激后细胞p-p38MAPK及p-ERK表达无变化,加入PMA、H7、CATG后,p-p38MAPK及p-ERK表达亦无变化.原方及有效组分生物碱和苷对p-p38MAPK和p-ERK表达无显著影响;(4)各组NF-κB的表达均无显著变化.结论 补阳还五汤可下调凝血酶诱导的ECV-304细胞黏附分子的表达,生物碱和苷可能是方中产生该作用的有效物质.凝血酶激活ECV-304细胞的作用主要是通过PKC活化而介导的,p38MAPK、ERK、NF-κB信号通路并不是凝血酶活化ECV-304细胞的主要信号途径,补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷可能通过抑制凝血酶激活PKC这一信号途径而发挥其抗凝血酶活化血管内皮细胞的作用.
目的 研究補暘還五湯有效組分生物堿、苷對凝血酶刺激的血管內皮細胞株黏附分子錶達的影響及其信號轉導機製.方法 (1)體外培養臍靜脈內皮細胞株ECV-304細胞,以凝血酶(Thr)刺激,加入原方、生物堿、苷後培養,免疫細胞化學法檢測黏附分子PECAM-1(CD31)、ICAM-1(CD54)、E-selectin和PKCα的錶達;(2)培養的ECV-304細胞,分彆給予Thr、Thr+H7[1-(5-異喹啉磺酰基)-2-甲基哌嗪]、PMA(彿波脂)、PMA+H7、Thr+CATG(組織蛋白酶-G)、Thr+原方、Thr+生物堿、Thr+苷,免疫細胞化學法檢測細胞蛋白激酶Cα(protein kinase C α,PKCα)、燐痠化p38絲裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)、燐痠化細胞外信號調節激酶(phospho-extracellular signal regulated kinase,p-ERK)和覈因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)錶達的變化.結果 (1)凝血酶刺激後黏附分子PECAM-1、ICAM-1和E-selectin增彊(P<0.05).與凝血酶組比較,原方組這3種黏附分子錶達降低(P<0.05);生物堿組和苷組PECAM-1、ICAM-1錶達降低(P<0.05), E-selectin錶達無顯著變化;(2)凝血酶可促進ECV-304細胞PKCα的錶達(P<0.01).PKC激活劑PMA刺激細胞後,PKCα錶達增彊(P<0.01);PKC抑製劑H7作用于PMA刺激的ECV-304細胞後,PKCα錶達被抑製;PAR-1抑製劑CATG作用于凝血酶刺激的細胞後,PKCα錶達被顯著抑製(P<0.05).原方(50、100 mg/mL)、生物堿(2 mg/mL)和苷(1.25、2.5、5 mg/mL)均可顯著抑製凝血酶誘導的PKCα錶達(P<0.05);(3)凝血酶刺激後細胞p-p38MAPK及p-ERK錶達無變化,加入PMA、H7、CATG後,p-p38MAPK及p-ERK錶達亦無變化.原方及有效組分生物堿和苷對p-p38MAPK和p-ERK錶達無顯著影響;(4)各組NF-κB的錶達均無顯著變化.結論 補暘還五湯可下調凝血酶誘導的ECV-304細胞黏附分子的錶達,生物堿和苷可能是方中產生該作用的有效物質.凝血酶激活ECV-304細胞的作用主要是通過PKC活化而介導的,p38MAPK、ERK、NF-κB信號通路併不是凝血酶活化ECV-304細胞的主要信號途徑,補暘還五湯及其有效組分生物堿、苷可能通過抑製凝血酶激活PKC這一信號途徑而髮揮其抗凝血酶活化血管內皮細胞的作用.
목적 연구보양환오탕유효조분생물감、감대응혈매자격적혈관내피세포주점부분자표체적영향급기신호전도궤제.방법 (1)체외배양제정맥내피세포주ECV-304세포,이응혈매(Thr)자격,가입원방、생물감、감후배양,면역세포화학법검측점부분자PECAM-1(CD31)、ICAM-1(CD54)、E-selectin화PKCα적표체;(2)배양적ECV-304세포,분별급여Thr、Thr+H7[1-(5-이규람광선기)-2-갑기고진]、PMA(불파지)、PMA+H7、Thr+CATG(조직단백매-G)、Thr+원방、Thr+생물감、Thr+감,면역세포화학법검측세포단백격매Cα(protein kinase C α,PKCα)、린산화p38사렬원활화단백격매(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)、린산화세포외신호조절격매(phospho-extracellular signal regulated kinase,p-ERK)화핵인자-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)표체적변화.결과 (1)응혈매자격후점부분자PECAM-1、ICAM-1화E-selectin증강(P<0.05).여응혈매조비교,원방조저3충점부분자표체강저(P<0.05);생물감조화감조PECAM-1、ICAM-1표체강저(P<0.05), E-selectin표체무현저변화;(2)응혈매가촉진ECV-304세포PKCα적표체(P<0.01).PKC격활제PMA자격세포후,PKCα표체증강(P<0.01);PKC억제제H7작용우PMA자격적ECV-304세포후,PKCα표체피억제;PAR-1억제제CATG작용우응혈매자격적세포후,PKCα표체피현저억제(P<0.05).원방(50、100 mg/mL)、생물감(2 mg/mL)화감(1.25、2.5、5 mg/mL)균가현저억제응혈매유도적PKCα표체(P<0.05);(3)응혈매자격후세포p-p38MAPK급p-ERK표체무변화,가입PMA、H7、CATG후,p-p38MAPK급p-ERK표체역무변화.원방급유효조분생물감화감대p-p38MAPK화p-ERK표체무현저영향;(4)각조NF-κB적표체균무현저변화.결론 보양환오탕가하조응혈매유도적ECV-304세포점부분자적표체,생물감화감가능시방중산생해작용적유효물질.응혈매격활ECV-304세포적작용주요시통과PKC활화이개도적,p38MAPK、ERK、NF-κB신호통로병불시응혈매활화ECV-304세포적주요신호도경,보양환오탕급기유효조분생물감、감가능통과억제응혈매격활PKC저일신호도경이발휘기항응혈매활화혈관내피세포적작용.
