CAJ | 학술논문

目的:建立实时荧光定量逆转录 -多聚酶链反应(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)检测人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA的方法,并研究其与CD4+CD25+ Treg细胞活性相关性.方法: 提取人外周血单个核细胞总RNA,将mRNA逆转录成cDNA,以 β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3 mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4+CD25 +Treg细胞含量,分析两者相关性.结果:哮喘患儿组 CD4+CD25+Treg细胞百分率明显低于同龄对照组, P＜0.01;FOXP3 mRNA的表达也显著降低,P＜0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物.结论:应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3 mRNA表达水平简便易行、结果稳定可靠.初步结果证实,外周血CD4 +CD25+Treg细胞数量和FOXP3 mRNA表达有相同的趋势,存在一定的相关性.
목적:건립실시형광정량역전록 -다취매련반응(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)검측인외주혈단개핵세포중FOXP3 mRNA적방법,병연구기여CD4+CD25+ Treg세포활성상관성.방법: 제취인외주혈단개핵세포총RNA,장mRNA역전록성cDNA,이 β-actin위내삼조,실시형광정량RT-PCR검측29례효천환인급24례동령대조FOXP3 mRNA적상대표체량,채용융해곡선화경지당전영감정PCR산물특이성;동시채용류식세포기술검측CD4+CD25 +Treg세포함량,분석량자상관성.결과:효천환인조 CD4+CD25+Treg세포백분솔명현저우동령대조조, P＜0.01;FOXP3 mRNA적표체야현저강저,P＜0.05;FOXP3화β-actin적융해곡선분석표명균부유단일봉,Tm치분별위82.4℃화87.8℃;경지당전영현시도부유단일확증산물.결론:응용SYBR GreenⅠ실시형광정량RT-PCR기술검측FOXP3 mRNA표체수평간편역행、결과은정가고.초보결과증실,외주혈CD4 +CD25+Treg세포수량화FOXP3 mRNA표체유상동적추세,존재일정적상관성.