中国农业科技导报
中國農業科技導報
중국농업과기도보
REVIEW OF CHINA AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010年
5期
80-85
,共6页
罗建杰%王亚茹%袁铁铮%柏映国%黄火清%罗会颖%姚斌%范云六
囉建傑%王亞茹%袁鐵錚%柏映國%黃火清%囉會穎%姚斌%範雲六
라건걸%왕아여%원철쟁%백영국%황화청%라회영%요빈%범운륙
木聚糖酶%毕赤酵母%XYN-W%高效表达%比活性改良
木聚糖酶%畢赤酵母%XYN-W%高效錶達%比活性改良
목취당매%필적효모%XYN-W%고효표체%비활성개량
将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子.SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上.XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m.用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%.
將來源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整閤到畢赤酵母錶達載體pPIC9上,通過電擊轉化得到重組轉化子.SDS-PAGE分析和錶達產物的研究錶明,木聚糖酶基因xyn-w得到瞭高效分泌錶達,在5 L髮酵罐中木聚糖酶蛋白錶達量達到1 mg/mL,酶活性達到13 000 IU以上.XYN-W的C耑57箇氨基痠序列為連接序列和錨定區域,利用PCR方法將此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m.用相同方法構建高效錶達XYN-M蛋白的畢赤酵母工程菌株,錶達產物經純化後進行酶學性質測定,結果錶明,其比活為19 856.6 IU/mg,Kcat值為4 433.8 s-1,與純化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分彆提高瞭43.9%和63.2%.
장래원우류위진균Neocallimastix frontalis적고비활목취당매기인xyn-w정합도필적효모표체재체pPIC9상,통과전격전화득도중조전화자.SDS-PAGE분석화표체산물적연구표명,목취당매기인xyn-w득도료고효분비표체,재5 L발효관중목취당매단백표체량체도1 mg/mL,매활성체도13 000 IU이상.XYN-W적C단57개안기산서렬위련접서렬화묘정구역,이용PCR방법장차단서렬거제,득도절단적목취당매서렬xyn-m.용상동방법구건고효표체XYN-M단백적필적효모공정균주,표체산물경순화후진행매학성질측정,결과표명,기비활위19 856.6 IU/mg,Kcat치위4 433.8 s-1,여순화적XYN-W단백(비활성13 795.3 IU/mg、Kcat치2 717.1 s-1)상비,분별제고료43.9%화63.2%.
