CAJ | 학술논문

构建携带Cetuximab全长抗体与Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)融合蛋白的腺病毒,探讨其在体外表达情况,及其与EGFR和HER2的结合能力.通过PCR,将抗体cetuximab基因与编码Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)的序列融合,构建携带西妥昔单抗全长基因与Herin融合基因的腺病毒穿梭载体pDC339-AT2一Herin,并在293细胞内包装成重组病毒Ad5-AT2-Herin.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Ad5-AT2-Herin表达全长抗体融合蛋白的体外表达量;应用Western印迹法检测所表达全长抗体轻重链的完整性及均衡性;应用间接免疫荧光法(IFA)检测所表达的融合蛋白与EGFR(+)Her2(-)的A431细胞,以及EGFR(-)Her2(+)的SK-OV-3细胞膜结合的特异性.ELISA检测分析表明,AdS-AT2-Herin在293细胞中的表达量为209.3 ng/mL-317.3 ng/mL;Western blot显示轻重链表达平衡,大小符合预期;间接免疫荧光(IFA)显示腺病毒表达的融合蛋白与A431细胞表面受体EGFR及SK-OV-3细胞表面受体Her2均能特异性结合.成功构建携带EGFR和HER2双特异性抗体基因的腺病毒载体Ad5-AT2-Herin,该载体在体外能高效表达双特异性抗体蛋白AT2-Herin,而且AT2-Herin蛋白能在体外与EGFR和HER2特异结合.
구건휴대Cetuximab전장항체여Herstatin C말단79개안기산(Herin)융합단백적선병독,탐토기재체외표체정황,급기여EGFR화HER2적결합능력.통과PCR,장항체cetuximab기인여편마Herstatin C말단79개안기산(Herin)적서렬융합,구건휴대서타석단항전장기인여Herin융합기인적선병독천사재체pDC339-AT2일Herin,병재293세포내포장성중조병독Ad5-AT2-Herin.통과매련면역흡부시험(ELISA)검측Ad5-AT2-Herin표체전장항체융합단백적체외표체량;응용Western인적법검측소표체전장항체경중련적완정성급균형성;응용간접면역형광법(IFA)검측소표체적융합단백여EGFR(+)Her2(-)적A431세포,이급EGFR(-)Her2(+)적SK-OV-3세포막결합적특이성.ELISA검측분석표명,AdS-AT2-Herin재293세포중적표체량위209.3 ng/mL-317.3 ng/mL;Western blot현시경중련표체평형,대소부합예기;간접면역형광(IFA)현시선병독표체적융합단백여A431세포표면수체EGFR급SK-OV-3세포표면수체Her2균능특이성결합.성공구건휴대EGFR화HER2쌍특이성항체기인적선병독재체Ad5-AT2-Herin,해재체재체외능고효표체쌍특이성항체단백AT2-Herin,이차AT2-Herin단백능재체외여EGFR화HER2특이결합.