中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
9期
665-670
,共6页
李晓艳%葛金英%哈斯苏荣%王琪%焦丽红%王永%步志高
李曉豔%葛金英%哈斯囌榮%王琪%焦麗紅%王永%步誌高
리효염%갈금영%합사소영%왕기%초려홍%왕영%보지고
人偏肺病毒%反向遗传技术%病毒拯救%绿色荧光蛋白
人偏肺病毒%反嚮遺傳技術%病毒拯救%綠色熒光蛋白
인편폐병독%반향유전기술%병독증구%록색형광단백
人偏肺病毒(hMPV)是最新发现的与呼吸道疾病有关的病原体.为构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的B型重组hMPV,本研究利用反向遗传学技术,以表达EGFP的hMPV NL/1/99株全长cDNA质粒重组pPS-hMPV-EGFP,及其4种辅助重组质粒pCITE-N、pCITE-P、pCITE-L、pCITE-M2.1为基础,共转染BHK-21细胞进行重组病毒的拯救.鉴定结果表明拯救的重组病毒rhMPV-NL-EGFP高效表达外源基因EGFP.rhMPV-NL-EGFP与亲本病毒株具有相似的生物学特性,生长滴度可达106.7 TCID50/mL.rhMPV-NL-EGFP在细胞中连续传代10代仍然维持外源基因的高效和稳定表达,病毒滴度于室温条件下可维持长时间稳定.分别利用亲本病毒株和重组病毒rhMPV-NL-EGFP进行免疫小鼠血清中和抗体检测,结果显示两种方法具有较好的相似性(p＞0.05).本研究为病毒中和抗体的检测提供了更为快捷的新方法,同时为hMPV感染发病机制及疫苗研究奠定了基础.
人偏肺病毒(hMPV)是最新髮現的與呼吸道疾病有關的病原體.為構建錶達增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)的B型重組hMPV,本研究利用反嚮遺傳學技術,以錶達EGFP的hMPV NL/1/99株全長cDNA質粒重組pPS-hMPV-EGFP,及其4種輔助重組質粒pCITE-N、pCITE-P、pCITE-L、pCITE-M2.1為基礎,共轉染BHK-21細胞進行重組病毒的拯救.鑒定結果錶明拯救的重組病毒rhMPV-NL-EGFP高效錶達外源基因EGFP.rhMPV-NL-EGFP與親本病毒株具有相似的生物學特性,生長滴度可達106.7 TCID50/mL.rhMPV-NL-EGFP在細胞中連續傳代10代仍然維持外源基因的高效和穩定錶達,病毒滴度于室溫條件下可維持長時間穩定.分彆利用親本病毒株和重組病毒rhMPV-NL-EGFP進行免疫小鼠血清中和抗體檢測,結果顯示兩種方法具有較好的相似性(p＞0.05).本研究為病毒中和抗體的檢測提供瞭更為快捷的新方法,同時為hMPV感染髮病機製及疫苗研究奠定瞭基礎.
인편폐병독(hMPV)시최신발현적여호흡도질병유관적병원체.위구건표체증강형록색형광단백(EGFP)적B형중조hMPV,본연구이용반향유전학기술,이표체EGFP적hMPV NL/1/99주전장cDNA질립중조pPS-hMPV-EGFP,급기4충보조중조질립pCITE-N、pCITE-P、pCITE-L、pCITE-M2.1위기출,공전염BHK-21세포진행중조병독적증구.감정결과표명증구적중조병독rhMPV-NL-EGFP고효표체외원기인EGFP.rhMPV-NL-EGFP여친본병독주구유상사적생물학특성,생장적도가체106.7 TCID50/mL.rhMPV-NL-EGFP재세포중련속전대10대잉연유지외원기인적고효화은정표체,병독적도우실온조건하가유지장시간은정.분별이용친본병독주화중조병독rhMPV-NL-EGFP진행면역소서혈청중화항체검측,결과현시량충방법구유교호적상사성(p＞0.05).본연구위병독중화항체적검측제공료경위쾌첩적신방법,동시위hMPV감염발병궤제급역묘연구전정료기출.
