内科理论与实践
內科理論與實踐
내과이론여실천
JOURNAL OF INTERNAL MEDICINE CONCEPTS & PRACTICE
2012年
3期
175-179
,共5页
胡文秀%方启晨%董坤%宋倩倩%姜杉%杨文静%贾伟平
鬍文秀%方啟晨%董坤%宋倩倩%薑杉%楊文靜%賈偉平
호문수%방계신%동곤%송천천%강삼%양문정%가위평
小鼠谷胱甘肽S转移酶K1%启动子%荧光素酶%报告基因
小鼠穀胱甘肽S轉移酶K1%啟動子%熒光素酶%報告基因
소서곡광감태S전이매K1%계동자%형광소매%보고기인
目的:构建小鼠谷胱甘肽S转移酶K1 (mGSTK1)启动子荧光素酶报告基因质粒,并分析其活性.方法:根据GeneBank中mGSTK1基因序列设计引物,应用PCR技术扩增mGSTK1启动子片段,插入pGL3-basic载体,获得mGSTK1启动子报告基因质粒pGL3-mGSTKl-2046.再以pGL3-mGSTK l-2046为模板,进一步构建了2个5’端部分缺失的报告基因质粒:pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK l-76.将构建的报告基因质粒瞬时转染不同的细胞株3T3-L1和人胚肾(HEK)293,48 h后检测荧光素酶的活性.结果:所构建的质粒经酶切、测序鉴定正确.pGL3-mGSTK1-2046在3T3-L1和HEK293中均有不同程度的转录活性.将pGL3-mGSTK1 -2046、pGL3-mGSTK1 -936和pGL3-mGSTK1 -76转染HEK293细胞.结果显示pGL3-mGSTK1 -936转录活性最高,而pGL3-mGSTK1 -76转录活性显著降低.结论:成功构建mGSTK1启动子荧光素酶报告基因质粒；翻译起始点上游的-971～-111 bp片段是mGSTK1启动子的重要区域.为深入了解mGSTK1启动子的调控机制以及今后对代谢性疾病的治疗提供一定的实验基础.
目的:構建小鼠穀胱甘肽S轉移酶K1 (mGSTK1)啟動子熒光素酶報告基因質粒,併分析其活性.方法:根據GeneBank中mGSTK1基因序列設計引物,應用PCR技術擴增mGSTK1啟動子片段,插入pGL3-basic載體,穫得mGSTK1啟動子報告基因質粒pGL3-mGSTKl-2046.再以pGL3-mGSTK l-2046為模闆,進一步構建瞭2箇5’耑部分缺失的報告基因質粒:pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK l-76.將構建的報告基因質粒瞬時轉染不同的細胞株3T3-L1和人胚腎(HEK)293,48 h後檢測熒光素酶的活性.結果:所構建的質粒經酶切、測序鑒定正確.pGL3-mGSTK1-2046在3T3-L1和HEK293中均有不同程度的轉錄活性.將pGL3-mGSTK1 -2046、pGL3-mGSTK1 -936和pGL3-mGSTK1 -76轉染HEK293細胞.結果顯示pGL3-mGSTK1 -936轉錄活性最高,而pGL3-mGSTK1 -76轉錄活性顯著降低.結論:成功構建mGSTK1啟動子熒光素酶報告基因質粒；翻譯起始點上遊的-971～-111 bp片段是mGSTK1啟動子的重要區域.為深入瞭解mGSTK1啟動子的調控機製以及今後對代謝性疾病的治療提供一定的實驗基礎.
목적:구건소서곡광감태S전이매K1 (mGSTK1)계동자형광소매보고기인질립,병분석기활성.방법:근거GeneBank중mGSTK1기인서렬설계인물,응용PCR기술확증mGSTK1계동자편단,삽입pGL3-basic재체,획득mGSTK1계동자보고기인질립pGL3-mGSTKl-2046.재이pGL3-mGSTK l-2046위모판,진일보구건료2개5’단부분결실적보고기인질립:pGL3-mGSTK1-936화pGL3-mGSTK l-76.장구건적보고기인질립순시전염불동적세포주3T3-L1화인배신(HEK)293,48 h후검측형광소매적활성.결과:소구건적질립경매절、측서감정정학.pGL3-mGSTK1-2046재3T3-L1화HEK293중균유불동정도적전록활성.장pGL3-mGSTK1 -2046、pGL3-mGSTK1 -936화pGL3-mGSTK1 -76전염HEK293세포.결과현시pGL3-mGSTK1 -936전록활성최고,이pGL3-mGSTK1 -76전록활성현저강저.결론:성공구건mGSTK1계동자형광소매보고기인질립；번역기시점상유적-971～-111 bp편단시mGSTK1계동자적중요구역.위심입료해mGSTK1계동자적조공궤제이급금후대대사성질병적치료제공일정적실험기출.
