CAJ | 학술논문

目的制备并筛选有效沉默SGC-7901细胞维甲酸受体β(RARβ)基因的最佳siRNA序列,观察RARβ靶向沉默对4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)抑制SGC-7901细胞增殖作用的影响.方法针对人RARβ全序列设计合成3条siRNA,以lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染至SGC-7901细胞.转染后24、48 h应用RT-PCR和Western blot技术分别检测SGC-7901细胞内RARβ的mRNA和蛋白表达.选用最佳siRNA序列靶向沉默SGC-7901细胞RARβ后6 h加入ATPR(终浓度为10-5mol·L-1),72 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期动力学,分光光度法检测细胞裂解液中碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化.结果靶向沉默SGC-7901细胞中RARβ基因的最佳序列为siRNA-RARβ-homo-466且在浓度为100 pm·L-1、与Lipo的比例为1:0.05时沉默效果最佳.与未沉默的ATPR给药组比较,RARβ-homo-466序列转染沉默后ATPR(10-5mol·L-1)给药组SGC-7901细胞增殖活性升高,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多(P<0.01),ALP和LDH活力显著增强(P<0.05).结论 siRNA-RARβ-homo-466可有效沉默RARβ基因的表达;RARβ沉默后,对ATPR敏感的SGC-7901细胞表现出ATPR抗性,提示RARβ可能是介导ATPR作用于SGC-7901细胞的主要环节.
목적 제비병사선유효침묵SGC-7901세포유갑산수체β(RARβ)기인적최가siRNA서렬,관찰RARβ파향침묵대4-안기-2-삼불갑기분기유갑산지(ATPR)억제SGC-7901세포증식작용적영향.방법 침대인RARβ전서렬설계합성3조siRNA,이lipofectamine 2000(Lipo)위재체전염지SGC-7901세포.전염후24、48 h응용RT-PCR화Western blot기술분별검측SGC-7901세포내RARβ적mRNA화단백표체.선용최가siRNA서렬파향침묵SGC-7901세포RARβ후6 h가입ATPR(종농도위10-5mol·L-1),72 h후MTT법검측세포증식,류식세포의측정세포주기동역학,분광광도법검측세포렬해액중감성린산매(ALP)화유산탈경매(LDH)활력적변화.결과 파향침묵SGC-7901세포중RARβ기인적최가서렬위siRNA-RARβ-homo-466차재농도위100 pm·L-1、여Lipo적비례위1:0.05시침묵효과최가.여미침묵적ATPR급약조비교,RARβ-homo-466서렬전염침묵후ATPR(10-5mol·L-1)급약조SGC-7901세포증식활성승고,G0/G1기세포감소,S기세포증다(P<0.01),ALP화LDH활력현저증강(P<0.05).결론 siRNA-RARβ-homo-466가유효침묵RARβ기인적표체;RARβ침묵후,대ATPR민감적SGC-7901세포표현출ATPR항성,제시RARβ가능시개도ATPR작용우SGC-7901세포적주요배절.