吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2006年
1期
145-149
,共5页
高艳光%费君伟%费瑞%曾宪录
高豔光%費君偉%費瑞%曾憲錄
고염광%비군위%비서%증헌록
L选择素%原核表达%多克隆抗体%大肠杆菌
L選擇素%原覈錶達%多剋隆抗體%大腸桿菌
L선택소%원핵표체%다극륭항체%대장간균
目的:构建人L-选择素原核表达载体,表达并纯化人L-选择素重组蛋白,制备兔抗人L-选择素多克隆抗体.方法:利用人L-选择素cDNA的N末端胞外结构区153个氨基酸的开放阅读框架(ORF),通过PCR方法扩增出人L-选择素目的片段.将扩增的基因插入表达载体pQE40的BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点之间,再经转化使其在大肠杆菌M15中表达,产生含6-His-tag的融合蛋白.融合蛋白经Ni亲合层析柱纯化和SDS-PAGE分析后,用以免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体.最后经Western blotting检测和斑点杂交(DIBA)进行抗体效价测定.结果:酶切鉴定和DNA测序显示,pQE40-L-选择素重组表达载体含有人L-选择素N末端结构区153个氨基酸的cDNA序列;通过在大肠杆菌M15中的表达和纯化分析,获得了蛋白含量为600 mg·L-1的人L-选择素蛋白;通过免疫新西兰白兔和抗体效价测定,得到抗血清效价达1:1 000的多克隆抗体.结论:人L-选择素蛋白可在M15大肠杆菌中高效表达,其多克隆抗体效价较高.
目的:構建人L-選擇素原覈錶達載體,錶達併純化人L-選擇素重組蛋白,製備兔抗人L-選擇素多剋隆抗體.方法:利用人L-選擇素cDNA的N末耑胞外結構區153箇氨基痠的開放閱讀框架(ORF),通過PCR方法擴增齣人L-選擇素目的片段.將擴增的基因插入錶達載體pQE40的BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位點之間,再經轉化使其在大腸桿菌M15中錶達,產生含6-His-tag的融閤蛋白.融閤蛋白經Ni親閤層析柱純化和SDS-PAGE分析後,用以免疫新西蘭白兔,製備多剋隆抗體.最後經Western blotting檢測和斑點雜交(DIBA)進行抗體效價測定.結果:酶切鑒定和DNA測序顯示,pQE40-L-選擇素重組錶達載體含有人L-選擇素N末耑結構區153箇氨基痠的cDNA序列;通過在大腸桿菌M15中的錶達和純化分析,穫得瞭蛋白含量為600 mg·L-1的人L-選擇素蛋白;通過免疫新西蘭白兔和抗體效價測定,得到抗血清效價達1:1 000的多剋隆抗體.結論:人L-選擇素蛋白可在M15大腸桿菌中高效錶達,其多剋隆抗體效價較高.
목적:구건인L-선택소원핵표체재체,표체병순화인L-선택소중조단백,제비토항인L-선택소다극륭항체.방법:이용인L-선택소cDNA적N말단포외결구구153개안기산적개방열독광가(ORF),통과PCR방법확증출인L-선택소목적편단.장확증적기인삽입표체재체pQE40적BamH Ⅰ화Hind Ⅲ매절위점지간,재경전화사기재대장간균M15중표체,산생함6-His-tag적융합단백.융합단백경Ni친합층석주순화화SDS-PAGE분석후,용이면역신서란백토,제비다극륭항체.최후경Western blotting검측화반점잡교(DIBA)진행항체효개측정.결과:매절감정화DNA측서현시,pQE40-L-선택소중조표체재체함유인L-선택소N말단결구구153개안기산적cDNA서렬;통과재대장간균M15중적표체화순화분석,획득료단백함량위600 mg·L-1적인L-선택소단백;통과면역신서란백토화항체효개측정,득도항혈청효개체1:1 000적다극륭항체.결론:인L-선택소단백가재M15대장간균중고효표체,기다극륭항체효개교고.
