中国卫生检验杂志
中國衛生檢驗雜誌
중국위생검험잡지
CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY
2007年
5期
807-809
,共3页
胡英会%芦宝静%尹素改%陈强%王娜%杨继红
鬍英會%蘆寶靜%尹素改%陳彊%王娜%楊繼紅
호영회%호보정%윤소개%진강%왕나%양계홍
B组轮状病毒%vp7基因%克隆%GST融合蛋白表达%抗体制备
B組輪狀病毒%vp7基因%剋隆%GST融閤蛋白錶達%抗體製備
B조륜상병독%vp7기인%극륭%GST융합단백표체%항체제비
目的:在大肠杆菌中表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白并制备其兔抗血清.方法:根据B组轮状病毒(GBRV)WH-2株vp7基因的全序列设计引物,用PCR的方法扩增得到vp7基因的编码区.将其克隆到原核GST融合表达载体pGEX-KG内,转化大肠杆菌E. coliDH5α,IPTG诱导表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白,经SDS-PAGE分离纯化表达的蛋白免疫新西兰兔,制备人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白抗血清.结果:经鉴定确认,vp7基因以正确的方式插入到载体中,此重组表达载体经IPTG诱导后,可表达相对分子量为53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白.制备的抗血清经同样诱导表达的表达载体pGEX-KG表达产物吸收后1:500倍稀释后用Western Blot分析,与53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白获得特异性显色信号.结论:人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白成功在大肠杆菌中GST融合表达,所表达的蛋白和制备的抗体不但为研究结构与功能提供了物质基础,也为GBRV所引起的疾病预防、诊断和治疗等流行病学研究和临床诊断奠定了基础,具有重要实际应用价值.
目的:在大腸桿菌中錶達人B組輪狀病毒WH-2株VP7蛋白併製備其兔抗血清.方法:根據B組輪狀病毒(GBRV)WH-2株vp7基因的全序列設計引物,用PCR的方法擴增得到vp7基因的編碼區.將其剋隆到原覈GST融閤錶達載體pGEX-KG內,轉化大腸桿菌E. coliDH5α,IPTG誘導錶達人B組輪狀病毒WH-2株VP7蛋白,經SDS-PAGE分離純化錶達的蛋白免疫新西蘭兔,製備人B組輪狀病毒WH-2株VP7蛋白抗血清.結果:經鑒定確認,vp7基因以正確的方式插入到載體中,此重組錶達載體經IPTG誘導後,可錶達相對分子量為53.4 kDa的GST-VP7融閤蛋白.製備的抗血清經同樣誘導錶達的錶達載體pGEX-KG錶達產物吸收後1:500倍稀釋後用Western Blot分析,與53.4 kDa的GST-VP7融閤蛋白穫得特異性顯色信號.結論:人B組輪狀病毒WH-2株VP7蛋白成功在大腸桿菌中GST融閤錶達,所錶達的蛋白和製備的抗體不但為研究結構與功能提供瞭物質基礎,也為GBRV所引起的疾病預防、診斷和治療等流行病學研究和臨床診斷奠定瞭基礎,具有重要實際應用價值.
목적:재대장간균중표체인B조륜상병독WH-2주VP7단백병제비기토항혈청.방법:근거B조륜상병독(GBRV)WH-2주vp7기인적전서렬설계인물,용PCR적방법확증득도vp7기인적편마구.장기극륭도원핵GST융합표체재체pGEX-KG내,전화대장간균E. coliDH5α,IPTG유도표체인B조륜상병독WH-2주VP7단백,경SDS-PAGE분리순화표체적단백면역신서란토,제비인B조륜상병독WH-2주VP7단백항혈청.결과:경감정학인,vp7기인이정학적방식삽입도재체중,차중조표체재체경IPTG유도후,가표체상대분자량위53.4 kDa적GST-VP7융합단백.제비적항혈청경동양유도표체적표체재체pGEX-KG표체산물흡수후1:500배희석후용Western Blot분석,여53.4 kDa적GST-VP7융합단백획득특이성현색신호.결론:인B조륜상병독WH-2주VP7단백성공재대장간균중GST융합표체,소표체적단백화제비적항체불단위연구결구여공능제공료물질기출,야위GBRV소인기적질병예방、진단화치료등류행병학연구화림상진단전정료기출,구유중요실제응용개치.
