上海中医药杂志
上海中醫藥雜誌
상해중의약잡지
SHANGHAI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2008年
1期
3-7
,共5页
刘成海%宣红萍%陶艳艳%胡义扬
劉成海%宣紅萍%陶豔豔%鬍義颺
류성해%선홍평%도염염%호의양
扶正化瘀方%药理学%药物血清%肝星状细胞%整合素%信号转导
扶正化瘀方%藥理學%藥物血清%肝星狀細胞%整閤素%信號轉導
부정화어방%약이학%약물혈청%간성상세포%정합소%신호전도
目的 探讨不同活化状态肝星状细胞(HSC)的纤维连接蛋白(FN),整合素的信号转导特点,以及扶正化瘀方干预FN刺激HSC活化的抗肝纤维化分子药理机制.方法 分离培养大鼠HSC,以10%小牛血清/M199原代培养于FN包被培养板中,以无FN包被培养细胞为对照,动态观察FN对原代培养HSC的影响;以原代培养1天的HSC为药效模型,分别加入10%大鼠血清(NRS)与扶正化瘀方药物血清,温育4～18h,倒置显微镜观察HSC形态,MTT法测定HSC增殖,alamarBlue法观察HSC的动态增殖变化,Western印迹法检测α-SMA、整合素α5β1、粘着斑激酶(FAK)和细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达水平,磷酸化抗体Western印迹法检测分析FAK与ERK磷酸化水平.结果 ①无包被培养HSC随培养时间延长,细胞伸展与增殖明显,α-SMA和整合素α5β1蛋白表达增加;FN包被能明显促进培养早期(1 d)静止HSC的增殖、α-SMA和整合素α5β1蛋白表达及ERK、FAK磷酸化;动态观察发现,FN能明显促进分离培养16～32h大鼠HSC的增殖,而后进入平台期,FN促HSC增殖作用减弱,对培养4、7 d的HSC的活化与信号分子表达影响也不明显.②与无血清培养细胞比较,正常大鼠血清与扶正化瘀方药物血清可明显促进FN包被的静止HSC的α-SMA与整合素β1表达、ERK与FAK磷酸化;与正常大鼠血清比较,扶正化瘀方药物血清可明显抑制FN与血清刺激的静止HSC增殖、α-SMA与整合素β1表达、ERK与FAK磷酸化.结论 FN可促进静止HSC活化,机制与上调整合素/FAK、ERK信号分子活性有关;中药药物血清可较好用于基于细胞外基质(ECM)成分细胞信号转导的中药分子药理机制研究;扶正化瘀方可明显抑制FN刺激的HSC增殖活化,作用机制与下调整合素/FAK信号通路有关.
目的 探討不同活化狀態肝星狀細胞(HSC)的纖維連接蛋白(FN),整閤素的信號轉導特點,以及扶正化瘀方榦預FN刺激HSC活化的抗肝纖維化分子藥理機製.方法 分離培養大鼠HSC,以10%小牛血清/M199原代培養于FN包被培養闆中,以無FN包被培養細胞為對照,動態觀察FN對原代培養HSC的影響;以原代培養1天的HSC為藥效模型,分彆加入10%大鼠血清(NRS)與扶正化瘀方藥物血清,溫育4～18h,倒置顯微鏡觀察HSC形態,MTT法測定HSC增殖,alamarBlue法觀察HSC的動態增殖變化,Western印跡法檢測α-SMA、整閤素α5β1、粘著斑激酶(FAK)和細胞外信號調節激酶(ERK)蛋白錶達水平,燐痠化抗體Western印跡法檢測分析FAK與ERK燐痠化水平.結果 ①無包被培養HSC隨培養時間延長,細胞伸展與增殖明顯,α-SMA和整閤素α5β1蛋白錶達增加;FN包被能明顯促進培養早期(1 d)靜止HSC的增殖、α-SMA和整閤素α5β1蛋白錶達及ERK、FAK燐痠化;動態觀察髮現,FN能明顯促進分離培養16～32h大鼠HSC的增殖,而後進入平檯期,FN促HSC增殖作用減弱,對培養4、7 d的HSC的活化與信號分子錶達影響也不明顯.②與無血清培養細胞比較,正常大鼠血清與扶正化瘀方藥物血清可明顯促進FN包被的靜止HSC的α-SMA與整閤素β1錶達、ERK與FAK燐痠化;與正常大鼠血清比較,扶正化瘀方藥物血清可明顯抑製FN與血清刺激的靜止HSC增殖、α-SMA與整閤素β1錶達、ERK與FAK燐痠化.結論 FN可促進靜止HSC活化,機製與上調整閤素/FAK、ERK信號分子活性有關;中藥藥物血清可較好用于基于細胞外基質(ECM)成分細胞信號轉導的中藥分子藥理機製研究;扶正化瘀方可明顯抑製FN刺激的HSC增殖活化,作用機製與下調整閤素/FAK信號通路有關.
목적 탐토불동활화상태간성상세포(HSC)적섬유련접단백(FN),정합소적신호전도특점,이급부정화어방간예FN자격HSC활화적항간섬유화분자약리궤제.방법 분리배양대서HSC,이10%소우혈청/M199원대배양우FN포피배양판중,이무FN포피배양세포위대조,동태관찰FN대원대배양HSC적영향;이원대배양1천적HSC위약효모형,분별가입10%대서혈청(NRS)여부정화어방약물혈청,온육4～18h,도치현미경관찰HSC형태,MTT법측정HSC증식,alamarBlue법관찰HSC적동태증식변화,Western인적법검측α-SMA、정합소α5β1、점착반격매(FAK)화세포외신호조절격매(ERK)단백표체수평,린산화항체Western인적법검측분석FAK여ERK린산화수평.결과 ①무포피배양HSC수배양시간연장,세포신전여증식명현,α-SMA화정합소α5β1단백표체증가;FN포피능명현촉진배양조기(1 d)정지HSC적증식、α-SMA화정합소α5β1단백표체급ERK、FAK린산화;동태관찰발현,FN능명현촉진분리배양16～32h대서HSC적증식,이후진입평태기,FN촉HSC증식작용감약,대배양4、7 d적HSC적활화여신호분자표체영향야불명현.②여무혈청배양세포비교,정상대서혈청여부정화어방약물혈청가명현촉진FN포피적정지HSC적α-SMA여정합소β1표체、ERK여FAK린산화;여정상대서혈청비교,부정화어방약물혈청가명현억제FN여혈청자격적정지HSC증식、α-SMA여정합소β1표체、ERK여FAK린산화.결론 FN가촉진정지HSC활화,궤제여상조정합소/FAK、ERK신호분자활성유관;중약약물혈청가교호용우기우세포외기질(ECM)성분세포신호전도적중약분자약리궤제연구;부정화어방가명현억제FN자격적HSC증식활화,작용궤제여하조정합소/FAK신호통로유관.
