生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
515-517
,共3页
陈小芳%陈元仲%邹起练%陈显凌
陳小芳%陳元仲%鄒起練%陳顯凌
진소방%진원중%추기련%진현릉
纤维连接蛋白%细胞结合区功能多肽%杆状病毒表达系统%蛋白纯化
纖維連接蛋白%細胞結閤區功能多肽%桿狀病毒錶達繫統%蛋白純化
섬유련접단백%세포결합구공능다태%간상병독표체계통%단백순화
目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达纤维连接蛋白(FN)细胞结合区功能多肽(CBD),并对其进行纯化和鉴定.方法:经PCR获得人血浆FN-CBD基因,酶切后定向克隆到T载体上,经测序正确后插入pFastBacHTB载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞;用抗生素平板筛选重组杆粒,脂质体介导重组杆粒转染sf9昆虫细胞并进行蛋白表达;经Ni-NTA层析柱对重组多肽进行纯化,对纯化的多肽行SDS-PAGE和Western-blot分析.结果:得到融合6个组氨酸残基的FN-CBD,SDS-PAGE显示其相对分子质量约为36 000,Western-blot表明该多肽能与FN的多克隆抗体结合.结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统能成功表达出入血浆FN-CBD,且表达产物具有良好的免疫原性,为后续结构、功能研究奠定了基础.
目的:利用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統錶達纖維連接蛋白(FN)細胞結閤區功能多肽(CBD),併對其進行純化和鑒定.方法:經PCR穫得人血漿FN-CBD基因,酶切後定嚮剋隆到T載體上,經測序正確後插入pFastBacHTB載體,轉化大腸桿菌DH10Bac感受態細胞;用抗生素平闆篩選重組桿粒,脂質體介導重組桿粒轉染sf9昆蟲細胞併進行蛋白錶達;經Ni-NTA層析柱對重組多肽進行純化,對純化的多肽行SDS-PAGE和Western-blot分析.結果:得到融閤6箇組氨痠殘基的FN-CBD,SDS-PAGE顯示其相對分子質量約為36 000,Western-blot錶明該多肽能與FN的多剋隆抗體結閤.結論:利用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統能成功錶達齣入血漿FN-CBD,且錶達產物具有良好的免疫原性,為後續結構、功能研究奠定瞭基礎.
목적:이용Bac-to-Bac간상병독표체계통표체섬유련접단백(FN)세포결합구공능다태(CBD),병대기진행순화화감정.방법:경PCR획득인혈장FN-CBD기인,매절후정향극륭도T재체상,경측서정학후삽입pFastBacHTB재체,전화대장간균DH10Bac감수태세포;용항생소평판사선중조간립,지질체개도중조간립전염sf9곤충세포병진행단백표체;경Ni-NTA층석주대중조다태진행순화,대순화적다태행SDS-PAGE화Western-blot분석.결과:득도융합6개조안산잔기적FN-CBD,SDS-PAGE현시기상대분자질량약위36 000,Western-blot표명해다태능여FN적다극륭항체결합.결론:이용Bac-to-Bac간상병독표체계통능성공표체출입혈장FN-CBD,차표체산물구유량호적면역원성,위후속결구、공능연구전정료기출.
