潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2009年
6期
409-412,Ⅰ
,共5页
李东亮%郝建忠%孙岩%李武修%高玉光
李東亮%郝建忠%孫巖%李武脩%高玉光
리동량%학건충%손암%리무수%고옥광
Tet-on Advanced%Amelotin基因%RT-PCR%成釉细胞系%可调控表达
Tet-on Advanced%Amelotin基因%RT-PCR%成釉細胞繫%可調控錶達
Tet-on Advanced%Amelotin기인%RT-PCR%성유세포계%가조공표체
目的 应用Tet-on Advanced基因表达系统构建由强力霉素(Dox)诱导Amelotin基因表达的成釉细胞系,为进一步研究Amelotin基因的生物学功能奠定基础.方法 通过RT-PCT法从出生后7d的小鼠牙胚中克隆得到Amelotin的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight载体中,利用Tet-on Advanced基因表达系统先后将调控质粒pTet-on Advanced和反应质粒pTRE-Tight-Amelotin转入成釉细胞,分别用G418和潮霉素进行筛选,克隆扩增得到可诱导表达Amelotin基因的成釉细胞系.用RT-PCR法检测不同Dox浓度下转染成釉细胞中Amelotin基因的表达.结果 连续两个回合的转染及筛选后获得了引入pTet-on Advanced系统的细胞系,能够高诱导低背景表达Amelotin,在强力霉素诱导48h可以使Amelotin的表达显著增加,强力霉素在一定浓度范围内可以诱导Amelotin的表达呈剂量依赖性增加.结论 成功构建了受强力霉素调控的双重稳定表达Amelotin成釉细胞系,为进一步研究Amelotin与釉质矿化之间的关系奠定了基础.
目的 應用Tet-on Advanced基因錶達繫統構建由彊力黴素(Dox)誘導Amelotin基因錶達的成釉細胞繫,為進一步研究Amelotin基因的生物學功能奠定基礎.方法 通過RT-PCT法從齣生後7d的小鼠牙胚中剋隆得到Amelotin的全長基因,測序正確後將其亞剋隆入pTRE-Tight載體中,利用Tet-on Advanced基因錶達繫統先後將調控質粒pTet-on Advanced和反應質粒pTRE-Tight-Amelotin轉入成釉細胞,分彆用G418和潮黴素進行篩選,剋隆擴增得到可誘導錶達Amelotin基因的成釉細胞繫.用RT-PCR法檢測不同Dox濃度下轉染成釉細胞中Amelotin基因的錶達.結果 連續兩箇迴閤的轉染及篩選後穫得瞭引入pTet-on Advanced繫統的細胞繫,能夠高誘導低揹景錶達Amelotin,在彊力黴素誘導48h可以使Amelotin的錶達顯著增加,彊力黴素在一定濃度範圍內可以誘導Amelotin的錶達呈劑量依賴性增加.結論 成功構建瞭受彊力黴素調控的雙重穩定錶達Amelotin成釉細胞繫,為進一步研究Amelotin與釉質礦化之間的關繫奠定瞭基礎.
목적 응용Tet-on Advanced기인표체계통구건유강력매소(Dox)유도Amelotin기인표체적성유세포계,위진일보연구Amelotin기인적생물학공능전정기출.방법 통과RT-PCT법종출생후7d적소서아배중극륭득도Amelotin적전장기인,측서정학후장기아극륭입pTRE-Tight재체중,이용Tet-on Advanced기인표체계통선후장조공질립pTet-on Advanced화반응질립pTRE-Tight-Amelotin전입성유세포,분별용G418화조매소진행사선,극륭확증득도가유도표체Amelotin기인적성유세포계.용RT-PCR법검측불동Dox농도하전염성유세포중Amelotin기인적표체.결과 련속량개회합적전염급사선후획득료인입pTet-on Advanced계통적세포계,능구고유도저배경표체Amelotin,재강력매소유도48h가이사Amelotin적표체현저증가,강력매소재일정농도범위내가이유도Amelotin적표체정제량의뢰성증가.결론 성공구건료수강력매소조공적쌍중은정표체Amelotin성유세포계,위진일보연구Amelotin여유질광화지간적관계전정료기출.
