中国现代医药杂志
中國現代醫藥雜誌
중국현대의약잡지
MODERN MEDICINE JOURNAL OF CHINA
2010年
2期
8-11
,共4页
套叠PCR(SOE-PCR)%人胰岛素原%Klenow片段%基因克隆
套疊PCR(SOE-PCR)%人胰島素原%Klenow片段%基因剋隆
투첩PCR(SOE-PCR)%인이도소원%Klenow편단%기인극륭
目的 设计并分子克隆适宜于大肠杆菌表达系统的人胰岛素原基因.方法 以美国国家基因库(GenBank)发布的人胰岛素原的氨基酸序列为模板,参考大肠杆菌表达系统的密码子偏好性以及所用表达载体(pCEX一3x)的特点,经计算机分析、设计人胰岛素原基因为8个寡核苷酸片段,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术体外延伸获得完整的人胰岛素原基因,分子克隆后测定所得基因的核苷酸序列.结果 经限制性内切酶分析确定为重组克隆的质粒进行核苷酸序列分析,结果 表明,我们所克隆的基因序列完全符合我们先前的设计.结论 SOE-PCR技术可用于体外寡核苷酸片段的延伸并获得完整长度的基因.Taq DNA聚合酶延伸反应前以Klenow片段处理可提高较短覆盖末端或较低专一性末端正确延伸的成功率.
目的 設計併分子剋隆適宜于大腸桿菌錶達繫統的人胰島素原基因.方法 以美國國傢基因庫(GenBank)髮佈的人胰島素原的氨基痠序列為模闆,參攷大腸桿菌錶達繫統的密碼子偏好性以及所用錶達載體(pCEX一3x)的特點,經計算機分析、設計人胰島素原基因為8箇寡覈苷痠片段,以重疊延伸PCR(SOE-PCR)技術體外延伸穫得完整的人胰島素原基因,分子剋隆後測定所得基因的覈苷痠序列.結果 經限製性內切酶分析確定為重組剋隆的質粒進行覈苷痠序列分析,結果 錶明,我們所剋隆的基因序列完全符閤我們先前的設計.結論 SOE-PCR技術可用于體外寡覈苷痠片段的延伸併穫得完整長度的基因.Taq DNA聚閤酶延伸反應前以Klenow片段處理可提高較短覆蓋末耑或較低專一性末耑正確延伸的成功率.
목적 설계병분자극륭괄의우대장간균표체계통적인이도소원기인.방법 이미국국가기인고(GenBank)발포적인이도소원적안기산서렬위모판,삼고대장간균표체계통적밀마자편호성이급소용표체재체(pCEX일3x)적특점,경계산궤분석、설계인이도소원기인위8개과핵감산편단,이중첩연신PCR(SOE-PCR)기술체외연신획득완정적인이도소원기인,분자극륭후측정소득기인적핵감산서렬.결과 경한제성내절매분석학정위중조극륭적질립진행핵감산서렬분석,결과 표명,아문소극륭적기인서렬완전부합아문선전적설계.결론 SOE-PCR기술가용우체외과핵감산편단적연신병획득완정장도적기인.Taq DNA취합매연신반응전이Klenow편단처리가제고교단복개말단혹교저전일성말단정학연신적성공솔.
