草地学报
草地學報
초지학보
ACTA AGRESTIA SINICA
2010年
3期
345-351
,共7页
杂花苜蓿%SRAP%PCR%正交设计%优化
雜花苜蓿%SRAP%PCR%正交設計%優化
잡화목숙%SRAP%PCR%정교설계%우화
利用正交设计L16(45)对杂花苜蓿(Medicago varia Martin.)SRAP-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验,旨在建立一套适用于苜蓿属(Medicago L.)种质资源的SRAP标记技术体系.结果表明:各因素对PCR反应结果都有显著影响,由F值可知,dNTP的量对反应结果影响最大,其次是Taq酶的量,模版DNA浓度的影响最小,各因素水平的变化对PCR反应的影响依次为:dNTP>Taq酶>Mg2+>引物>模板DNA;筛选出各反应因素的最佳水平,建立杂花苜蓿SRAP-PCR反应的最佳体系(25 μL )为:dNTP 2 μL( 0.20 mmol·L-1),Taq DNA 聚合酶0.3 μL (1.50 U), Mg2+3 μL(1.50 mmol·L-1),上、下游引物各1 μL (0.40 μmol·L-1),50 ng模板DNA1 μL,10×PCR buffer 2.5 μL (不含Mg2+).这一优化体系的建立,为今后利用SRAP标记技术进行苜蓿属植物遗传图谱构建、遗传多样性分析及种质资源鉴定等研究奠定了技术基础.
利用正交設計L16(45)對雜花苜蓿(Medicago varia Martin.)SRAP-PCR反應體繫的5因素(Taq酶、Mg2+、模闆DNA、dNTP、引物)在4箇水平上進行優化試驗,旨在建立一套適用于苜蓿屬(Medicago L.)種質資源的SRAP標記技術體繫.結果錶明:各因素對PCR反應結果都有顯著影響,由F值可知,dNTP的量對反應結果影響最大,其次是Taq酶的量,模版DNA濃度的影響最小,各因素水平的變化對PCR反應的影響依次為:dNTP>Taq酶>Mg2+>引物>模闆DNA;篩選齣各反應因素的最佳水平,建立雜花苜蓿SRAP-PCR反應的最佳體繫(25 μL )為:dNTP 2 μL( 0.20 mmol·L-1),Taq DNA 聚閤酶0.3 μL (1.50 U), Mg2+3 μL(1.50 mmol·L-1),上、下遊引物各1 μL (0.40 μmol·L-1),50 ng模闆DNA1 μL,10×PCR buffer 2.5 μL (不含Mg2+).這一優化體繫的建立,為今後利用SRAP標記技術進行苜蓿屬植物遺傳圖譜構建、遺傳多樣性分析及種質資源鑒定等研究奠定瞭技術基礎.
이용정교설계L16(45)대잡화목숙(Medicago varia Martin.)SRAP-PCR반응체계적5인소(Taq매、Mg2+、모판DNA、dNTP、인물)재4개수평상진행우화시험,지재건립일투괄용우목숙속(Medicago L.)충질자원적SRAP표기기술체계.결과표명:각인소대PCR반응결과도유현저영향,유F치가지,dNTP적량대반응결과영향최대,기차시Taq매적량,모판DNA농도적영향최소,각인소수평적변화대PCR반응적영향의차위:dNTP>Taq매>Mg2+>인물>모판DNA;사선출각반응인소적최가수평,건립잡화목숙SRAP-PCR반응적최가체계(25 μL )위:dNTP 2 μL( 0.20 mmol·L-1),Taq DNA 취합매0.3 μL (1.50 U), Mg2+3 μL(1.50 mmol·L-1),상、하유인물각1 μL (0.40 μmol·L-1),50 ng모판DNA1 μL,10×PCR buffer 2.5 μL (불함Mg2+).저일우화체계적건립,위금후이용SRAP표기기술진행목숙속식물유전도보구건、유전다양성분석급충질자원감정등연구전정료기술기출.
