江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2006年
2期
136-138
,共3页
姜苏蓉%刘莉%陈晨%程蕴琳
薑囌蓉%劉莉%陳晨%程蘊琳
강소용%류리%진신%정온림
人胰岛素样生长因子1前体%基因%抗原性
人胰島素樣生長因子1前體%基因%抗原性
인이도소양생장인자1전체%기인%항원성
目的构建含有人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)前体编码基因的重组载体,在E.coliBL21中表达,并探讨其抗原性和应用价值.方法用PCR法,从现有重组质粒pBakPAK 8/hIGF-1中,扩增编码hIGF-1前体的基因片段,经双酶切、纯化、连接后得到pET29a(+)/hIGF-1重组体,再将其转化大肠杆菌BL21-CodonPlus并诱导表达.表达产物经镍柱亲和层析纯化后,用Western blot法检测重组蛋白的抗原活性.结果重组持粒pET29a(+)/hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析证实构建成功.在大肠杆菌BL21-CodonPlus中经IPTG诱导表达,有一相对分子质量15 000的重组蛋白hIGF-1前体,该蛋白经镍柱亲和层析获得了良好的纯化效果,具有特异的抗原活性.结论成功地克隆并表达相对分子质量为15 000的hIGF-1前体编码基因,为进一步制备抗hIGF-1抗体和后续hIGF-1生物学功能研究打下了良好基础.
目的構建含有人胰島素樣生長因子1(hIGF-1)前體編碼基因的重組載體,在E.coliBL21中錶達,併探討其抗原性和應用價值.方法用PCR法,從現有重組質粒pBakPAK 8/hIGF-1中,擴增編碼hIGF-1前體的基因片段,經雙酶切、純化、連接後得到pET29a(+)/hIGF-1重組體,再將其轉化大腸桿菌BL21-CodonPlus併誘導錶達.錶達產物經鎳柱親和層析純化後,用Western blot法檢測重組蛋白的抗原活性.結果重組持粒pET29a(+)/hIGF-1經雙酶切鑒定和測序分析證實構建成功.在大腸桿菌BL21-CodonPlus中經IPTG誘導錶達,有一相對分子質量15 000的重組蛋白hIGF-1前體,該蛋白經鎳柱親和層析穫得瞭良好的純化效果,具有特異的抗原活性.結論成功地剋隆併錶達相對分子質量為15 000的hIGF-1前體編碼基因,為進一步製備抗hIGF-1抗體和後續hIGF-1生物學功能研究打下瞭良好基礎.
목적구건함유인이도소양생장인자1(hIGF-1)전체편마기인적중조재체,재E.coliBL21중표체,병탐토기항원성화응용개치.방법용PCR법,종현유중조질립pBakPAK 8/hIGF-1중,확증편마hIGF-1전체적기인편단,경쌍매절、순화、련접후득도pET29a(+)/hIGF-1중조체,재장기전화대장간균BL21-CodonPlus병유도표체.표체산물경얼주친화층석순화후,용Western blot법검측중조단백적항원활성.결과중조지립pET29a(+)/hIGF-1경쌍매절감정화측서분석증실구건성공.재대장간균BL21-CodonPlus중경IPTG유도표체,유일상대분자질량15 000적중조단백hIGF-1전체,해단백경얼주친화층석획득료량호적순화효과,구유특이적항원활성.결론성공지극륭병표체상대분자질량위15 000적hIGF-1전체편마기인,위진일보제비항hIGF-1항체화후속hIGF-1생물학공능연구타하료량호기출.
