现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2007年
1期
10-13
,共4页
张明明%洪理泉%卢仁泉%郑佐娅
張明明%洪理泉%盧仁泉%鄭佐婭
장명명%홍리천%로인천%정좌아
cTnI-linker-TnC%融合蛋白%表达
cTnI-linker-TnC%融閤蛋白%錶達
cTnI-linker-TnC%융합단백%표체
目的 重组及表达人cTnI-linker-TnC融合蛋白.方法 应用PCR技术从人心脏cDNA文库分别扩增出cTnI和TnC基因,通过引物设计在两者之间加上19个中性氨基酸残基TS-(G4S)3-AC的linker编码序列,克隆PCR产物,并构建pET28a-cTnI-linker-TnC表达质粒,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达,NTA树脂亲和层析纯化后检测其纯度和免疫反应性.结果 成功构建了cTnI-linker-TnC融合蛋白的基因,并在大肠杆菌中实现可溶性高表达,在摇瓶中的表达量为21 mg/L,经一步NTA树脂亲和层析纯化,获得条带单一的目的蛋白,采用进口全自动免疫检测系统鉴定证实,目的蛋白有较高的免疫反应性.结论 采用原核表达方法可以获得具有高纯度和高免疫反应活性的cTnI-linker-TnC融合蛋白.
目的 重組及錶達人cTnI-linker-TnC融閤蛋白.方法 應用PCR技術從人心髒cDNA文庫分彆擴增齣cTnI和TnC基因,通過引物設計在兩者之間加上19箇中性氨基痠殘基TS-(G4S)3-AC的linker編碼序列,剋隆PCR產物,併構建pET28a-cTnI-linker-TnC錶達質粒,轉化入大腸桿菌錶達菌株BL21(DE3)中,用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導目的蛋白的錶達,NTA樹脂親和層析純化後檢測其純度和免疫反應性.結果 成功構建瞭cTnI-linker-TnC融閤蛋白的基因,併在大腸桿菌中實現可溶性高錶達,在搖瓶中的錶達量為21 mg/L,經一步NTA樹脂親和層析純化,穫得條帶單一的目的蛋白,採用進口全自動免疫檢測繫統鑒定證實,目的蛋白有較高的免疫反應性.結論 採用原覈錶達方法可以穫得具有高純度和高免疫反應活性的cTnI-linker-TnC融閤蛋白.
목적 중조급표체인cTnI-linker-TnC융합단백.방법 응용PCR기술종인심장cDNA문고분별확증출cTnI화TnC기인,통과인물설계재량자지간가상19개중성안기산잔기TS-(G4S)3-AC적linker편마서렬,극륭PCR산물,병구건pET28a-cTnI-linker-TnC표체질립,전화입대장간균표체균주BL21(DE3)중,용이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도목적단백적표체,NTA수지친화층석순화후검측기순도화면역반응성.결과 성공구건료cTnI-linker-TnC융합단백적기인,병재대장간균중실현가용성고표체,재요병중적표체량위21 mg/L,경일보NTA수지친화층석순화,획득조대단일적목적단백,채용진구전자동면역검측계통감정증실,목적단백유교고적면역반응성.결론 채용원핵표체방법가이획득구유고순도화고면역반응활성적cTnI-linker-TnC융합단백.
