细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
3期
225-227
,共3页
樊燕%江文正%张亚丽%闻洁君%郝文丽%钱旻
樊燕%江文正%張亞麗%聞潔君%郝文麗%錢旻
번연%강문정%장아려%문길군%학문려%전민
B7-DC%基因克隆%原核表达
B7-DC%基因剋隆%原覈錶達
B7-DC%기인극륭%원핵표체
目的: 构建小鼠B7-DC胞外段基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21中诱导表达.方法: 从小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(DC)中提取总RNA, 经RT-PCR扩增B7-DC胞外段, 并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中, 构建重组表达质粒pET32a(+)-B7-DCECD.重组质粒经双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21, 经IPTG诱导表达目的蛋白, 并用SDS-PAGE和Western blot进行检测.结果: 获得全长为582 bp的小鼠B7-DC胞外段基因, 经测序证实其序列正确.SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出Mr约为41 000的B7-DC胞外段蛋白.结论: 成功地构建了小鼠B7-DC胞外段基因原核表达载体, 并在E.coli BL21中进行表达, 为进一步研究B7-DC的功能奠定实验基础.
目的: 構建小鼠B7-DC胞外段基因的原覈錶達載體, 併在E.coli BL21中誘導錶達.方法: 從小鼠骨髓來源的未成熟樹突狀細胞(DC)中提取總RNA, 經RT-PCR擴增B7-DC胞外段, 併將其剋隆至原覈錶達載體pET32a(+)中, 構建重組錶達質粒pET32a(+)-B7-DCECD.重組質粒經雙酶切鑒定及序列測定後, 轉化E.coli BL21, 經IPTG誘導錶達目的蛋白, 併用SDS-PAGE和Western blot進行檢測.結果: 穫得全長為582 bp的小鼠B7-DC胞外段基因, 經測序證實其序列正確.SDS-PAGE和Western blot分析證實重組質粒可錶達齣Mr約為41 000的B7-DC胞外段蛋白.結論: 成功地構建瞭小鼠B7-DC胞外段基因原覈錶達載體, 併在E.coli BL21中進行錶達, 為進一步研究B7-DC的功能奠定實驗基礎.
목적: 구건소서B7-DC포외단기인적원핵표체재체, 병재E.coli BL21중유도표체.방법: 종소서골수래원적미성숙수돌상세포(DC)중제취총RNA, 경RT-PCR확증B7-DC포외단, 병장기극륭지원핵표체재체pET32a(+)중, 구건중조표체질립pET32a(+)-B7-DCECD.중조질립경쌍매절감정급서렬측정후, 전화E.coli BL21, 경IPTG유도표체목적단백, 병용SDS-PAGE화Western blot진행검측.결과: 획득전장위582 bp적소서B7-DC포외단기인, 경측서증실기서렬정학.SDS-PAGE화Western blot분석증실중조질립가표체출Mr약위41 000적B7-DC포외단단백.결론: 성공지구건료소서B7-DC포외단기인원핵표체재체, 병재E.coli BL21중진행표체, 위진일보연구B7-DC적공능전정실험기출.
