中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
1期
30-32,62
,共4页
孙琦%陈蔚青%孙爱华%严杰
孫琦%陳蔚青%孫愛華%嚴傑
손기%진위청%손애화%엄걸
问号钩端螺旋体%fliN基因%克隆%原核表达%鉴定
問號鉤耑螺鏇體%fliN基因%剋隆%原覈錶達%鑒定
문호구단라선체%fliN기인%극륭%원핵표체%감정
目的 克隆问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株鞭毛相关基因fliN并构建其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性.方法 提取钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长fliN基因片断,T-A克隆后测序.按常规方法 构建fliN基因原核表达系统,并用IPTG诱导目的 重组蛋白rFliN表达.采用SDS-PAGE结合Bio-Rad凝胶图象分析系统检测rFliN表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rFliN.采用兔抗问号钩体黄疸出血群赖株全菌抗血清的Western blot鉴定rFliN及其免疫反应性.结果 与报道的相应序列比较,所克隆的fliN基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.IPTG诱导原核表达系统pET32a-fliN-E.coliBL21DE3的rFliN表达量约占细菌总蛋白的30%,rFliN提纯后仅见单一的蛋白条带.rFliN能与抗血清发生免疫结合反应.结论 本研究成功地构建了高效表达目的 重组蛋白的问号钩体fliN基因原核表达系统,RFliN有良好的免疫反应性,为深入研究FliN致病及免疫保护作用奠定了基础.
目的 剋隆問號鉤耑螺鏇體(簡稱鉤體)黃疸齣血群賴型賴株鞭毛相關基因fliN併構建其原覈錶達繫統,鑒定錶達產物的免疫性.方法 提取鉤體株基因組DNA,高保真PCR擴增全長fliN基因片斷,T-A剋隆後測序.按常規方法 構建fliN基因原覈錶達繫統,併用IPTG誘導目的 重組蛋白rFliN錶達.採用SDS-PAGE結閤Bio-Rad凝膠圖象分析繫統檢測rFliN錶達量,Ni-NTA親和層析法提純rFliN.採用兔抗問號鉤體黃疸齣血群賴株全菌抗血清的Western blot鑒定rFliN及其免疫反應性.結果 與報道的相應序列比較,所剋隆的fliN基因覈苷痠和氨基痠序列相似性均為100%.IPTG誘導原覈錶達繫統pET32a-fliN-E.coliBL21DE3的rFliN錶達量約佔細菌總蛋白的30%,rFliN提純後僅見單一的蛋白條帶.rFliN能與抗血清髮生免疫結閤反應.結論 本研究成功地構建瞭高效錶達目的 重組蛋白的問號鉤體fliN基因原覈錶達繫統,RFliN有良好的免疫反應性,為深入研究FliN緻病及免疫保護作用奠定瞭基礎.
목적 극륭문호구단라선체(간칭구체)황달출혈군뢰형뢰주편모상관기인fliN병구건기원핵표체계통,감정표체산물적면역성.방법 제취구체주기인조DNA,고보진PCR확증전장fliN기인편단,T-A극륭후측서.안상규방법 구건fliN기인원핵표체계통,병용IPTG유도목적 중조단백rFliN표체.채용SDS-PAGE결합Bio-Rad응효도상분석계통검측rFliN표체량,Ni-NTA친화층석법제순rFliN.채용토항문호구체황달출혈군뢰주전균항혈청적Western blot감정rFliN급기면역반응성.결과 여보도적상응서렬비교,소극륭적fliN기인핵감산화안기산서렬상사성균위100%.IPTG유도원핵표체계통pET32a-fliN-E.coliBL21DE3적rFliN표체량약점세균총단백적30%,rFliN제순후부견단일적단백조대.rFliN능여항혈청발생면역결합반응.결론 본연구성공지구건료고효표체목적 중조단백적문호구체fliN기인원핵표체계통,RFliN유량호적면역반응성,위심입연구FliN치병급면역보호작용전정료기출.
