安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2008年
18期
7589-7590
,共2页
魏振林%田志环%焦传珍%董玲
魏振林%田誌環%焦傳珍%董玲
위진림%전지배%초전진%동령
Real Time PCR%检测体系%转基因番茄植株%熔解曲线
Real Time PCR%檢測體繫%轉基因番茄植株%鎔解麯線
Real Time PCR%검측체계%전기인번가식주%용해곡선
[目的]为转基因番茄植株的高通量筛选奠定基础.[方法]利用CTAB法提取番茄叶片总RNA进行Real Time PCR扩增,分析转Mi1.2基因的番茄植株表达水平的检测体系.[结果]提取RNA的A 260/A 280为1.78～1.88,RNA无明显降解.在严谨扩增条件下,引物SYBR2的扩增效率高于SYBR1.Mg 2+的适宜浓度为2.0 mg/L.Real Time PCR扩增产物具有良好的特异性,熔解曲线特异峰出现在84.5 ℃附近,在熔解曲线略低于83 ℃附近有极微弱的非特异峰.因此在定量反应中信号检测步骤应放在84 ℃.以4种不同模板分子数条件下扩增曲线Ct值得到的回归方程为Y=-3.78×log(copynumber)+39.50,相关系数为0.998.[结论]该试验获得的Real Time PCR体系可用于转基因植株表达水平的检测.
[目的]為轉基因番茄植株的高通量篩選奠定基礎.[方法]利用CTAB法提取番茄葉片總RNA進行Real Time PCR擴增,分析轉Mi1.2基因的番茄植株錶達水平的檢測體繫.[結果]提取RNA的A 260/A 280為1.78～1.88,RNA無明顯降解.在嚴謹擴增條件下,引物SYBR2的擴增效率高于SYBR1.Mg 2+的適宜濃度為2.0 mg/L.Real Time PCR擴增產物具有良好的特異性,鎔解麯線特異峰齣現在84.5 ℃附近,在鎔解麯線略低于83 ℃附近有極微弱的非特異峰.因此在定量反應中信號檢測步驟應放在84 ℃.以4種不同模闆分子數條件下擴增麯線Ct值得到的迴歸方程為Y=-3.78×log(copynumber)+39.50,相關繫數為0.998.[結論]該試驗穫得的Real Time PCR體繫可用于轉基因植株錶達水平的檢測.
[목적]위전기인번가식주적고통량사선전정기출.[방법]이용CTAB법제취번가협편총RNA진행Real Time PCR확증,분석전Mi1.2기인적번가식주표체수평적검측체계.[결과]제취RNA적A 260/A 280위1.78～1.88,RNA무명현강해.재엄근확증조건하,인물SYBR2적확증효솔고우SYBR1.Mg 2+적괄의농도위2.0 mg/L.Real Time PCR확증산물구유량호적특이성,용해곡선특이봉출현재84.5 ℃부근,재용해곡선략저우83 ℃부근유겁미약적비특이봉.인차재정량반응중신호검측보취응방재84 ℃.이4충불동모판분자수조건하확증곡선Ct치득도적회귀방정위Y=-3.78×log(copynumber)+39.50,상관계수위0.998.[결론]해시험획득적Real Time PCR체계가용우전기인식주표체수평적검측.
