山东大学学报（理学版）
山東大學學報（理學版）
산동대학학보（이학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
9期
11-17
,共7页
李子东%赵翠珠%周玲君%刘艳玲%向凤宁%夏光敏
李子東%趙翠珠%週玲君%劉豔玲%嚮鳳寧%夏光敏
리자동%조취주%주령군%류염령%향봉저%하광민
多花黑麦草%DREB1A基因%根癌农杆菌%遗传转化
多花黑麥草%DREB1A基因%根癌農桿菌%遺傳轉化
다화흑맥초%DREB1A기인%근암농간균%유전전화
采用携带卡那霉素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pBI121/DREB1A的根癌农杆菌AGL1, 对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化,并优化了各种影响因素.胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50 mg/L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,待抗性愈伤组织在IB分化培养基上分化成苗后用25 mg/L卡那霉素进一步筛选再生植株, 获得了部分抗性植株.抗性植株的总DNA用DREB1A基因的特异引物进行PCR检测,转化频率为2.14%,PCR-Southern blot进一步验证了转化植株基因组中含有该外源基因.各种影响转化效率因素的优化实验表明,当转化时菌液浓度的OD600为2.0、侵染时间为1 h、共培养时间为2 d、共培养温度为21 ℃及在共培养期间使用乙酰丁香酮等,均可明显提高转化频率.
採用攜帶卡那黴素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin啟動子驅動的錶達載體pBI121/DREB1A的根癌農桿菌AGL1, 對多花黑麥草幼胚來源的胚性愈傷組織進行瞭遺傳轉化,併優化瞭各種影響因素.胚性愈傷組織經根癌農桿菌感染和共培養後,用50 mg/L巴龍黴素篩選抗性愈傷組織,待抗性愈傷組織在IB分化培養基上分化成苗後用25 mg/L卡那黴素進一步篩選再生植株, 穫得瞭部分抗性植株.抗性植株的總DNA用DREB1A基因的特異引物進行PCR檢測,轉化頻率為2.14%,PCR-Southern blot進一步驗證瞭轉化植株基因組中含有該外源基因.各種影響轉化效率因素的優化實驗錶明,噹轉化時菌液濃度的OD600為2.0、侵染時間為1 h、共培養時間為2 d、共培養溫度為21 ℃及在共培養期間使用乙酰丁香酮等,均可明顯提高轉化頻率.
채용휴대잡나매소항성기인nptII화GUS기인적ubiquitin계동자구동적표체재체pBI121/DREB1A적근암농간균AGL1, 대다화흑맥초유배래원적배성유상조직진행료유전전화,병우화료각충영향인소.배성유상조직경근암농간균감염화공배양후,용50 mg/L파룡매소사선항성유상조직,대항성유상조직재IB분화배양기상분화성묘후용25 mg/L잡나매소진일보사선재생식주, 획득료부분항성식주.항성식주적총DNA용DREB1A기인적특이인물진행PCR검측,전화빈솔위2.14%,PCR-Southern blot진일보험증료전화식주기인조중함유해외원기인.각충영향전화효솔인소적우화실험표명,당전화시균액농도적OD600위2.0、침염시간위1 h、공배양시간위2 d、공배양온도위21 ℃급재공배양기간사용을선정향동등,균가명현제고전화빈솔.
