动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2009年
12期
25-29
,共5页
布鲁菌%OMP10重组蛋白%抗原性
佈魯菌%OMP10重組蛋白%抗原性
포로균%OMP10중조단백%항원성
设计1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白omp10的PCR扩增,得到了一个大小为330 bp的目的基因片段(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致.将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析,表明重组表达载体构建成功.将此重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,该基因以包涵体的形式在大肠埃希菌中表达,经过包涵体的变性、复性和亲和层析纯化,成功获得大小为14.2 ku的融合蛋白,与理论推测的蛋白分子质量一致;Western blot和间接ELISA试验证明,纯化之后的OMP10重组蛋白可以被布鲁菌阳性血清识别.
設計1對特異性引物對羊佈魯菌16M總DNA進行外膜蛋白omp10的PCR擴增,得到瞭一箇大小為330 bp的目的基因片段(去掉17箇氨基痠編碼的信號肽),測序證實它與國外報道的羊佈魯菌omp10基因完全一緻.將其剋隆到錶達載體PET-30a中,經酶切、PCR擴增和測序分析,錶明重組錶達載體構建成功.將此重組質粒轉化入大腸埃希菌BL21(DE3)中,IPTG誘導錶達,該基因以包涵體的形式在大腸埃希菌中錶達,經過包涵體的變性、複性和親和層析純化,成功穫得大小為14.2 ku的融閤蛋白,與理論推測的蛋白分子質量一緻;Western blot和間接ELISA試驗證明,純化之後的OMP10重組蛋白可以被佈魯菌暘性血清識彆.
설계1대특이성인물대양포로균16M총DNA진행외막단백omp10적PCR확증,득도료일개대소위330 bp적목적기인편단(거도17개안기산편마적신호태),측서증실타여국외보도적양포로균omp10기인완전일치.장기극륭도표체재체PET-30a중,경매절、PCR확증화측서분석,표명중조표체재체구건성공.장차중조질립전화입대장애희균BL21(DE3)중,IPTG유도표체,해기인이포함체적형식재대장애희균중표체,경과포함체적변성、복성화친화층석순화,성공획득대소위14.2 ku적융합단백,여이론추측적단백분자질량일치;Western blot화간접ELISA시험증명,순화지후적OMP10중조단백가이피포로균양성혈청식별.
