分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2010年
3期
612-618
,共7页
盛文涛%周劲松%汤泳萍%罗绍春%陈光宇
盛文濤%週勁鬆%湯泳萍%囉紹春%陳光宇
성문도%주경송%탕영평%라소춘%진광우
芦笋%SRAP%反应体系%优化%引物筛选
蘆筍%SRAP%反應體繫%優化%引物篩選
호순%SRAP%반응체계%우화%인물사선
本研究以芦笋基因组总DNA为模板,通过对芦笋SRAP反应体系的重要参数进行优化,建立了一套适用于芦笋的SRAP反应体系:25 Μl的反应体系中,模板DNA量80ng、Mg2+浓度3.0 mmol/L、上下游引物各0.2 μmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L、Taq DNA聚合酶1 U以及1×Buffer.扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5个循环:然后退火温度提高到50℃,35个循环;最后72℃延伸10 min.比较琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测SRAP扩增产物的多态性,结果发现:6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物比琼脂糖的效果好.利用该优化体系筛选引物,从256个SRAP引物组合中筛选出239个,它们具有扩增条带清晰、丰富、重复性好的优点,证明了此优化体系稳定可靠.
本研究以蘆筍基因組總DNA為模闆,通過對蘆筍SRAP反應體繫的重要參數進行優化,建立瞭一套適用于蘆筍的SRAP反應體繫:25 Μl的反應體繫中,模闆DNA量80ng、Mg2+濃度3.0 mmol/L、上下遊引物各0.2 μmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L、Taq DNA聚閤酶1 U以及1×Buffer.擴增程序為:94℃預變性3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5箇循環:然後退火溫度提高到50℃,35箇循環;最後72℃延伸10 min.比較瓊脂糖凝膠和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測SRAP擴增產物的多態性,結果髮現:6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測擴增產物比瓊脂糖的效果好.利用該優化體繫篩選引物,從256箇SRAP引物組閤中篩選齣239箇,它們具有擴增條帶清晰、豐富、重複性好的優點,證明瞭此優化體繫穩定可靠.
본연구이호순기인조총DNA위모판,통과대호순SRAP반응체계적중요삼수진행우화,건립료일투괄용우호순적SRAP반응체계:25 Μl적반응체계중,모판DNA량80ng、Mg2+농도3.0 mmol/L、상하유인물각0.2 μmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L、Taq DNA취합매1 U이급1×Buffer.확증정서위:94℃예변성3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5개순배:연후퇴화온도제고도50℃,35개순배;최후72℃연신10 min.비교경지당응효화변성취병희선알응효전영검측SRAP확증산물적다태성,결과발현:6%변성취병희선알응효전영검측확증산물비경지당적효과호.이용해우화체계사선인물,종256개SRAP인물조합중사선출239개,타문구유확증조대청석、봉부、중복성호적우점,증명료차우화체계은정가고.
