四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2006年
5期
700-703
,共4页
林云锋%敬伟%陈希哲%乔鞠%李志勇%严征斌%吴凌%田卫东
林雲鋒%敬偉%陳希哲%喬鞠%李誌勇%嚴徵斌%吳凌%田衛東
림운봉%경위%진희철%교국%리지용%엄정빈%오릉%전위동
人脂肪基质细胞%绿色荧光蛋白%基因转染%分化
人脂肪基質細胞%綠色熒光蛋白%基因轉染%分化
인지방기질세포%록색형광단백%기인전염%분화
目的 研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能.方法 体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况. 结果 重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16 h即有GFP表达,7 d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率最高为11.4%).感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导21 d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性.结论 重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法.
目的 研究綠色熒光蛋白(GFP)基因體外轉染人脂肪基質細胞的方法,併檢測基因轉染後細胞的生物學特性及分化潛能.方法 體外分離培養人脂肪基質細胞,用重組腺病毒載體Ad-GFP及脂質體介導質粒pEGFP-C1兩種方法轉染GFP基因,通過流式細胞術觀察比較GFP轉染和錶達的結果;倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況;將腺病毒介導的基因轉染細胞經成骨定嚮誘導後,檢測堿性燐痠酶錶達和鈣結節形成情況. 結果 重組GFP基因的腺病毒Ad-GFP轉染的脂肪基質細胞的感染率達(42.5±1.5)%,16 h即有GFP錶達,7 d時錶達趨于穩定,感染6週時仍可見有GFP錶達,明顯優于脂質體轉染組(轉染效率最高為11.4%).感染Ad-GFP後的脂肪基質細胞與未感染的對照組脂肪基質細胞成骨誘導分化後堿性燐痠酶(ALP)錶達均逐漸增高,兩組間差異無統計學意義(P>0.05);誘導21 d後兩組均見到茜素紅鈣鹽染色暘性.結論 重組GFP基因的腺病毒載體Ad-GFP可高效率感染脂肪基質細胞,基因轉染後細胞的增殖分化能力未受到影響,可以作為一種高效可靠的人脂肪基質細胞標記方法.
목적 연구록색형광단백(GFP)기인체외전염인지방기질세포적방법,병검측기인전염후세포적생물학특성급분화잠능.방법 체외분리배양인지방기질세포,용중조선병독재체Ad-GFP급지질체개도질립pEGFP-C1량충방법전염GFP기인,통과류식세포술관찰비교GFP전염화표체적결과;도치현미경하관찰세포생장정황;장선병독개도적기인전염세포경성골정향유도후,검측감성린산매표체화개결절형성정황. 결과 중조GFP기인적선병독Ad-GFP전염적지방기질세포적감염솔체(42.5±1.5)%,16 h즉유GFP표체,7 d시표체추우은정,감염6주시잉가견유GFP표체,명현우우지질체전염조(전염효솔최고위11.4%).감염Ad-GFP후적지방기질세포여미감염적대조조지방기질세포성골유도분화후감성린산매(ALP)표체균축점증고,량조간차이무통계학의의(P>0.05);유도21 d후량조균견도천소홍개염염색양성.결론 중조GFP기인적선병독재체Ad-GFP가고효솔감염지방기질세포,기인전염후세포적증식분화능력미수도영향,가이작위일충고효가고적인지방기질세포표기방법.
