浙江工业大学学报
浙江工業大學學報
절강공업대학학보
Journal of Zhejiang University of Technology
2012年
3期
257-260
,共4页
骨形态发生蛋白-2(BMP-2)%菌落PCR%麦芽糖结合蛋白%融合表达
骨形態髮生蛋白-2(BMP-2)%菌落PCR%麥芽糖結閤蛋白%融閤錶達
골형태발생단백-2(BMP-2)%균락PCR%맥아당결합단백%융합표체
骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白-2诱导成骨活性最强,在骨组织工程研究中最具研究意义.为获得能高效表达溶解性高的人骨形成蛋白-2 (BMP-2)的基因工程菌,用PCR方法扩增得到BMP-2的基因序列,直接将PCR产物连接到胞内融合表达型T载体质粒pMT-L上,构建包括麦芽糖结合蛋白(MBP)、连接肽、6个His、EKsite(Asp-AspAsp-Asp-Lys)和BMP-2的表达载体,转化E,coli DH5a,经抗性筛选和菌落PCR鉴定,抽提阳性克隆质粒转化表达宿主E.coli BL21(DE3),成功构建可在大肠杆菌细胞质内表达MBP-BMP-2融合蛋白的基因工程菌.工程菌经0.1 mmol/L IPTG诱导后,可获得表观分子量约为55 kD的以可溶形式表达的BMP-2融合蛋白.
骨形態髮生蛋白是一類調節骨組織髮育的生長因子,其中骨形態髮生蛋白-2誘導成骨活性最彊,在骨組織工程研究中最具研究意義.為穫得能高效錶達溶解性高的人骨形成蛋白-2 (BMP-2)的基因工程菌,用PCR方法擴增得到BMP-2的基因序列,直接將PCR產物連接到胞內融閤錶達型T載體質粒pMT-L上,構建包括麥芽糖結閤蛋白(MBP)、連接肽、6箇His、EKsite(Asp-AspAsp-Asp-Lys)和BMP-2的錶達載體,轉化E,coli DH5a,經抗性篩選和菌落PCR鑒定,抽提暘性剋隆質粒轉化錶達宿主E.coli BL21(DE3),成功構建可在大腸桿菌細胞質內錶達MBP-BMP-2融閤蛋白的基因工程菌.工程菌經0.1 mmol/L IPTG誘導後,可穫得錶觀分子量約為55 kD的以可溶形式錶達的BMP-2融閤蛋白.
골형태발생단백시일류조절골조직발육적생장인자,기중골형태발생단백-2유도성골활성최강,재골조직공정연구중최구연구의의.위획득능고효표체용해성고적인골형성단백-2 (BMP-2)적기인공정균,용PCR방법확증득도BMP-2적기인서렬,직접장PCR산물련접도포내융합표체형T재체질립pMT-L상,구건포괄맥아당결합단백(MBP)、련접태、6개His、EKsite(Asp-AspAsp-Asp-Lys)화BMP-2적표체재체,전화E,coli DH5a,경항성사선화균락PCR감정,추제양성극륭질립전화표체숙주E.coli BL21(DE3),성공구건가재대장간균세포질내표체MBP-BMP-2융합단백적기인공정균.공정균경0.1 mmol/L IPTG유도후,가획득표관분자량약위55 kD적이가용형식표체적BMP-2융합단백.
