CAJ | 학술논문

目的:通过RNA干扰(RNAi)技术特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞(CRL-1444)高血压相关基因FXYD5的表达,探索该基因在高血压发病机制中的作用.方法:设计并合成4个针对大鼠FXYD5基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照.将上述4个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染进大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(CRL-1444)内,采用CCK-8法检测FXYD5基因特异性沉默后对平滑肌细胞增殖的影响,采用划痕法(Woundhealing法)检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞迁移力的影响,采用超微量Na+-K+-ATPase测试盒检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞膜Na+-K+-ATPase活性的影响.结果:荧光实时定量PCR结果显示siRNA-1使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降86.71％(P＜ 0.01)；siRNA-2使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降90.17％(P＜ 0.01)；siRNA-con对照组与空白对照组FXYD5的mRNA表达差异无统计学意义(P＞ 0.05).CCK-8法检测结果显示siRNA-1、siRNA-2两组与对照组间细胞增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05).划痕法检测细胞迁移力结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞迁移力低于siRNA-con对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.01).Na+-K+-ATPas活性检测结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞Na+-K+-ATPas活性低于siRNA-con对照组(P＜ 0.05)和空白对照组(P＜0.01).结论:RNAi技术能特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞的FXYD5基因的表达水平；特异性沉默FXYD5基因表达后血管平滑肌细胞的增殖能力无明显变化,而细胞迁移力和细胞膜的Na+-K+-ATPase活性明显降低.
목적:통과RNA간우(RNAi)기술특이성침묵대서흉주동맥평활기세포(CRL-1444)고혈압상관기인FXYD5적표체,탐색해기인재고혈압발병궤제중적작용.방법:설계병합성4개침대대서FXYD5기인적특이성siRNA편단(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4),이함비특이성편마서렬적siRNA-con위대조.장상술4개편단급음성대조통과양리자지질체법전염진대서흉주동맥평활기세포주(CRL-1444)내,채용CCK-8법검측FXYD5기인특이성침묵후대평활기세포증식적영향,채용화흔법(Woundhealing법)검측FXYD5기인특이성침묵후대세포천이력적영향,채용초미량Na+-K+-ATPase측시합검측FXYD5기인특이성침묵후대세포막Na+-K+-ATPase활성적영향.결과:형광실시정량PCR결과현시siRNA-1사FXYD5적mRNA표체여공백대조조상비하강86.71％(P＜ 0.01)；siRNA-2사FXYD5적mRNA표체여공백대조조상비하강90.17％(P＜ 0.01)；siRNA-con대조조여공백대조조FXYD5적mRNA표체차이무통계학의의(P＞ 0.05).CCK-8법검측결과현시siRNA-1、siRNA-2량조여대조조간세포증식능력차이무통계학의의(P＞0.05).화흔법검측세포천이력결과현시siRNA-1화siRNA-2량조평활기세포천이력저우siRNA-con대조조화공백대조조,차이유통계학의의(P＜ 0.01).Na+-K+-ATPas활성검측결과현시siRNA-1화siRNA-2량조평활기세포Na+-K+-ATPas활성저우siRNA-con대조조(P＜ 0.05)화공백대조조(P＜0.01).결론:RNAi기술능특이성침묵대서흉주동맥평활기세포적FXYD5기인적표체수평；특이성침묵FXYD5기인표체후혈관평활기세포적증식능력무명현변화,이세포천이력화세포막적Na+-K+-ATPase활성명현강저.