家畜生态学报
傢畜生態學報
가축생태학보
ACTA ECOLOGAE ANIMALIS DOMASTICI
2013年
10期
10-15
,共6页
甘鹏%熊亮%贾文超%潘传英%蓝贤勇%陈宏
甘鵬%熊亮%賈文超%潘傳英%藍賢勇%陳宏
감붕%웅량%가문초%반전영%람현용%진굉
牛%诱导多潜能干细胞(iPS)%c-Myc基因%TAT%多聚精氨酸(9R)%原核表达
牛%誘導多潛能榦細胞(iPS)%c-Myc基因%TAT%多聚精氨痠(9R)%原覈錶達
우%유도다잠능간세포(iPS)%c-Myc기인%TAT%다취정안산(9R)%원핵표체
bovine%Induced pluripotent stem cell (iPS)%c-Myc gene%TAT peptide%Poly-(Arg) 9%prokaryotic expression
原癌基因c-Myc虽然在许多肿瘤组织中特异性高表达,但它也是机体正常细胞生长与增殖所必需的因子,然而目前家畜诱导多潜能干细胞(iPS)研究中关于多功能转录因子c-Myc的报道很少.为此,研究拟利用蛋白转导区域(PTD)的跨膜作用,构建TAT-bc-Myc-9R融合表达载体,并对其进行原核表达,旨在为转录因子蛋白重编程牛体细胞奠定基础.试验以牛c-Myc基因编码区序列为参考,设计并合成含酶切位点、跨膜转导肽TAT和9R的引物,利用PCR等基因工程方法获得包括牛c-Myc、TAT和9R的重组原核表达载体(pTAT-HA-bc-Myc-9R);酶切鉴定和DNA测序结果表明,试验成功获得bc-Myc-9R重组序列,成功构建重组质粒pTAT-bc-Myc-9R;不同IPTG浓度和诱导时间条件对该重组载体的诱导表达和SDS-PAGE分析表明,TAT-bc-Myc-9R在0.6 mmol/L IPTG和37℃诱导6h条件下表达约57KDa的目的蛋白.这些结果为PTD介导的转录因子蛋白直接重编程牛体细胞以获得iPS研究积累了科学资料.
原癌基因c-Myc雖然在許多腫瘤組織中特異性高錶達,但它也是機體正常細胞生長與增殖所必需的因子,然而目前傢畜誘導多潛能榦細胞(iPS)研究中關于多功能轉錄因子c-Myc的報道很少.為此,研究擬利用蛋白轉導區域(PTD)的跨膜作用,構建TAT-bc-Myc-9R融閤錶達載體,併對其進行原覈錶達,旨在為轉錄因子蛋白重編程牛體細胞奠定基礎.試驗以牛c-Myc基因編碼區序列為參攷,設計併閤成含酶切位點、跨膜轉導肽TAT和9R的引物,利用PCR等基因工程方法穫得包括牛c-Myc、TAT和9R的重組原覈錶達載體(pTAT-HA-bc-Myc-9R);酶切鑒定和DNA測序結果錶明,試驗成功穫得bc-Myc-9R重組序列,成功構建重組質粒pTAT-bc-Myc-9R;不同IPTG濃度和誘導時間條件對該重組載體的誘導錶達和SDS-PAGE分析錶明,TAT-bc-Myc-9R在0.6 mmol/L IPTG和37℃誘導6h條件下錶達約57KDa的目的蛋白.這些結果為PTD介導的轉錄因子蛋白直接重編程牛體細胞以穫得iPS研究積纍瞭科學資料.
원암기인c-Myc수연재허다종류조직중특이성고표체,단타야시궤체정상세포생장여증식소필수적인자,연이목전가축유도다잠능간세포(iPS)연구중관우다공능전록인자c-Myc적보도흔소.위차,연구의이용단백전도구역(PTD)적과막작용,구건TAT-bc-Myc-9R융합표체재체,병대기진행원핵표체,지재위전록인자단백중편정우체세포전정기출.시험이우c-Myc기인편마구서렬위삼고,설계병합성함매절위점、과막전도태TAT화9R적인물,이용PCR등기인공정방법획득포괄우c-Myc、TAT화9R적중조원핵표체재체(pTAT-HA-bc-Myc-9R);매절감정화DNA측서결과표명,시험성공획득bc-Myc-9R중조서렬,성공구건중조질립pTAT-bc-Myc-9R;불동IPTG농도화유도시간조건대해중조재체적유도표체화SDS-PAGE분석표명,TAT-bc-Myc-9R재0.6 mmol/L IPTG화37℃유도6h조건하표체약57KDa적목적단백.저사결과위PTD개도적전록인자단백직접중편정우체세포이획득iPS연구적루료과학자료.
