基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2013年
11期
1440-1445
,共6页
王平%肖琳%董俊红%孙凤祥%蒋吉英%王守训
王平%肖琳%董俊紅%孫鳳祥%蔣吉英%王守訓
왕평%초림%동준홍%손봉상%장길영%왕수훈
双靶点RNA干扰%survivin%hTERT
雙靶點RNA榦擾%survivin%hTERT
쌍파점RNA간우%survivin%hTERT
double inierferenee siRNA%survivin%hTERT
目的 构建人端粒酶反转录酶(hTERT)和生存素(survivin)基因表达的RNA共干扰载体,并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和survivin基因的干扰作用.方法 根据Genbank提供的hTERT和survivin cDNA序列,设计、筛选出高效、特异性强的干扰序列,构建特异性干扰hTERT基因和survivin基因的重组体pGenesil-1.1-survivin、pGenesil-1.2-hTERT,酶切、测序鉴定正确后,两个重组体均用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,将pGenesil-1.1-survivin回收大片段,pGenesil-1.2-hTERT回收小片段,将回收大、小片段用T4 DNA连接酶定向连接,即构建成重组体pGenesil1.1-survivin-h TERT.将3个重组体分别转染SW480细胞,RT-PCR检测细胞中hTERT和survivin基因表达水平,MTT检测对SW480细胞增殖的影响.结果 构建的各质粒经限制性酶切及DNA测序均证明其质粒构建正确,RT-PCR检测hTERT和survivin基因表达水平明显降低(P＜0.05),各干扰质粒重组体对细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).结论 靶向survivin和hTERT基因的双干扰载体构建成功,为后续的结肠癌基因治疗研究奠定理论基础.
目的 構建人耑粒酶反轉錄酶(hTERT)和生存素(survivin)基因錶達的RNA共榦擾載體,併檢測其對人結腸癌SW480細胞中hTERT基因和survivin基因的榦擾作用.方法 根據Genbank提供的hTERT和survivin cDNA序列,設計、篩選齣高效、特異性彊的榦擾序列,構建特異性榦擾hTERT基因和survivin基因的重組體pGenesil-1.1-survivin、pGenesil-1.2-hTERT,酶切、測序鑒定正確後,兩箇重組體均用HindⅢ和BamHⅠ雙酶切,將pGenesil-1.1-survivin迴收大片段,pGenesil-1.2-hTERT迴收小片段,將迴收大、小片段用T4 DNA連接酶定嚮連接,即構建成重組體pGenesil1.1-survivin-h TERT.將3箇重組體分彆轉染SW480細胞,RT-PCR檢測細胞中hTERT和survivin基因錶達水平,MTT檢測對SW480細胞增殖的影響.結果 構建的各質粒經限製性酶切及DNA測序均證明其質粒構建正確,RT-PCR檢測hTERT和survivin基因錶達水平明顯降低(P＜0.05),各榦擾質粒重組體對細胞增殖有明顯的抑製作用(P＜0.05).結論 靶嚮survivin和hTERT基因的雙榦擾載體構建成功,為後續的結腸癌基因治療研究奠定理論基礎.
목적 구건인단립매반전록매(hTERT)화생존소(survivin)기인표체적RNA공간우재체,병검측기대인결장암SW480세포중hTERT기인화survivin기인적간우작용.방법 근거Genbank제공적hTERT화survivin cDNA서렬,설계、사선출고효、특이성강적간우서렬,구건특이성간우hTERT기인화survivin기인적중조체pGenesil-1.1-survivin、pGenesil-1.2-hTERT,매절、측서감정정학후,량개중조체균용HindⅢ화BamHⅠ쌍매절,장pGenesil-1.1-survivin회수대편단,pGenesil-1.2-hTERT회수소편단,장회수대、소편단용T4 DNA련접매정향련접,즉구건성중조체pGenesil1.1-survivin-h TERT.장3개중조체분별전염SW480세포,RT-PCR검측세포중hTERT화survivin기인표체수평,MTT검측대SW480세포증식적영향.결과 구건적각질립경한제성매절급DNA측서균증명기질립구건정학,RT-PCR검측hTERT화survivin기인표체수평명현강저(P＜0.05),각간우질립중조체대세포증식유명현적억제작용(P＜0.05).결론 파향survivin화hTERT기인적쌍간우재체구건성공,위후속적결장암기인치료연구전정이론기출.
