中国组织化学与细胞化学杂志
中國組織化學與細胞化學雜誌
중국조직화학여세포화학잡지
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISY AND CYTOCHEMISY
2013年
5期
401-405
,共5页
亚砷酸钠%糖尿病%Nrf2基因沉默%胰岛β细胞%细胞毒性
亞砷痠鈉%糖尿病%Nrf2基因沉默%胰島β細胞%細胞毒性
아신산납%당뇨병%Nrf2기인침묵%이도β세포%세포독성
目的 探讨用RNA干扰技术下调核转录因子Nrf2的表达,对亚砷酸钠诱发的小鼠胰岛β细胞毒性损伤的影响.方法 将针对Nrf2和非针对阴性对照的shRNA慢病毒颗粒稳定转染至小鼠胰岛β细胞MIN6,利用Real-time PCR和Western Blot检测细胞的Nrf2的表达,筛选Nrf2基因沉默(Nrf2-KD)和阴性对照(Scr)的细胞;应用4μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)作用于Nrf2-KD和Scr细胞24h,通过光学显微镜观察细胞的形态和贴壁数量的改变;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长情况;利用Western Blot检测细胞内cleaved-caspase-3蛋白的表达.结果成功建立稳定转染的Nrf2基因沉默的小鼠胰岛β细胞系MIN6,与Scr细胞相比,Nrf2-KD细胞的Nrf2基因和蛋白表达水平显著降低.4μmol/L亚砷酸钠暴露24h后,与Scr细胞相比,Nrf2-KD细胞贴壁数量、细胞体积、细胞生长活性都显著下降,而细胞内的cleaved-caspase-3蛋白表达明显升高.结论 Nrf2基因沉默的小鼠胰岛β细胞对亚砷酸钠暴露诱发的细胞毒性损伤更敏感.
目的 探討用RNA榦擾技術下調覈轉錄因子Nrf2的錶達,對亞砷痠鈉誘髮的小鼠胰島β細胞毒性損傷的影響.方法 將針對Nrf2和非針對陰性對照的shRNA慢病毒顆粒穩定轉染至小鼠胰島β細胞MIN6,利用Real-time PCR和Western Blot檢測細胞的Nrf2的錶達,篩選Nrf2基因沉默(Nrf2-KD)和陰性對照(Scr)的細胞;應用4μmol/L亞砷痠鈉(NaAsO2)作用于Nrf2-KD和Scr細胞24h,通過光學顯微鏡觀察細胞的形態和貼壁數量的改變;四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測細胞生長情況;利用Western Blot檢測細胞內cleaved-caspase-3蛋白的錶達.結果成功建立穩定轉染的Nrf2基因沉默的小鼠胰島β細胞繫MIN6,與Scr細胞相比,Nrf2-KD細胞的Nrf2基因和蛋白錶達水平顯著降低.4μmol/L亞砷痠鈉暴露24h後,與Scr細胞相比,Nrf2-KD細胞貼壁數量、細胞體積、細胞生長活性都顯著下降,而細胞內的cleaved-caspase-3蛋白錶達明顯升高.結論 Nrf2基因沉默的小鼠胰島β細胞對亞砷痠鈉暴露誘髮的細胞毒性損傷更敏感.
목적 탐토용RNA간우기술하조핵전록인자Nrf2적표체,대아신산납유발적소서이도β세포독성손상적영향.방법 장침대Nrf2화비침대음성대조적shRNA만병독과립은정전염지소서이도β세포MIN6,이용Real-time PCR화Western Blot검측세포적Nrf2적표체,사선Nrf2기인침묵(Nrf2-KD)화음성대조(Scr)적세포;응용4μmol/L아신산납(NaAsO2)작용우Nrf2-KD화Scr세포24h,통과광학현미경관찰세포적형태화첩벽수량적개변;사갑기우담서염(MTT)법검측세포생장정황;이용Western Blot검측세포내cleaved-caspase-3단백적표체.결과성공건립은정전염적Nrf2기인침묵적소서이도β세포계MIN6,여Scr세포상비,Nrf2-KD세포적Nrf2기인화단백표체수평현저강저.4μmol/L아신산납폭로24h후,여Scr세포상비,Nrf2-KD세포첩벽수량、세포체적、세포생장활성도현저하강,이세포내적cleaved-caspase-3단백표체명현승고.결론 Nrf2기인침묵적소서이도β세포대아신산납폭로유발적세포독성손상경민감.
