中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2013年
5期
63-68,后插12
,共7页
张力%周昕%谢英%刘超%徐增年%刘树锋
張力%週昕%謝英%劉超%徐增年%劉樹鋒
장력%주흔%사영%류초%서증년%류수봉
人BAFF%转基因%斑马鱼%早期免疫基因%系统性红斑狼疮
人BAFF%轉基因%斑馬魚%早期免疫基因%繫統性紅斑狼瘡
인BAFF%전기인%반마어%조기면역기인%계통성홍반랑창
目的 建立人BAFF转基因斑马鱼模型,探讨其在自身免疫性疾病发病中的作用.方法 RT-PCR法由人淋巴瘤细胞克隆了人BAFF基因全长855 bp蛋白编码区域,构建表达人BAFF重组质粒Tol2-hBAFF,体外细胞转染并通过免疫印迹法验证蛋白表达.重组载体经显微注射斑马鱼受精卵后,GFP荧光跟踪并筛选阳性鱼.qPCR法检测早期免疫相关基因表达情况.结果 人BAFF-GFP融合蛋白可成功表达,利用Tol2-hBAFF重组质粒显微注射斑马鱼受精卵可获得表达人BAFF的转基因斑马鱼,且表达人BAFF斑马鱼dpf胚胎中TCRAC明显高表达,而Ikaros则表达量显著降低,表明在斑马鱼胚胎中表达人BAFF蛋白会造成早期淋巴系统中基因的过早表达.结论 建立的表达人BAFF的转基因斑马鱼,可为系统性红斑狼疮等与BAFF功能亢进密切相关的自身免疫性疾病的治疗,及相关机制研究提供一种具有诸多优点的新型工具.
目的 建立人BAFF轉基因斑馬魚模型,探討其在自身免疫性疾病髮病中的作用.方法 RT-PCR法由人淋巴瘤細胞剋隆瞭人BAFF基因全長855 bp蛋白編碼區域,構建錶達人BAFF重組質粒Tol2-hBAFF,體外細胞轉染併通過免疫印跡法驗證蛋白錶達.重組載體經顯微註射斑馬魚受精卵後,GFP熒光跟蹤併篩選暘性魚.qPCR法檢測早期免疫相關基因錶達情況.結果 人BAFF-GFP融閤蛋白可成功錶達,利用Tol2-hBAFF重組質粒顯微註射斑馬魚受精卵可穫得錶達人BAFF的轉基因斑馬魚,且錶達人BAFF斑馬魚dpf胚胎中TCRAC明顯高錶達,而Ikaros則錶達量顯著降低,錶明在斑馬魚胚胎中錶達人BAFF蛋白會造成早期淋巴繫統中基因的過早錶達.結論 建立的錶達人BAFF的轉基因斑馬魚,可為繫統性紅斑狼瘡等與BAFF功能亢進密切相關的自身免疫性疾病的治療,及相關機製研究提供一種具有諸多優點的新型工具.
목적 건립인BAFF전기인반마어모형,탐토기재자신면역성질병발병중적작용.방법 RT-PCR법유인림파류세포극륭료인BAFF기인전장855 bp단백편마구역,구건표체인BAFF중조질립Tol2-hBAFF,체외세포전염병통과면역인적법험증단백표체.중조재체경현미주사반마어수정란후,GFP형광근종병사선양성어.qPCR법검측조기면역상관기인표체정황.결과 인BAFF-GFP융합단백가성공표체,이용Tol2-hBAFF중조질립현미주사반마어수정란가획득표체인BAFF적전기인반마어,차표체인BAFF반마어dpf배태중TCRAC명현고표체,이Ikaros칙표체량현저강저,표명재반마어배태중표체인BAFF단백회조성조기림파계통중기인적과조표체.결론 건립적표체인BAFF적전기인반마어,가위계통성홍반랑창등여BAFF공능항진밀절상관적자신면역성질병적치료,급상관궤제연구제공일충구유제다우점적신형공구.
