中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2013年
5期
57-62,68
,共7页
唐东红%罕圆圆%罗云%王城宽%黄英%毕正生%叶尤松
唐東紅%罕圓圓%囉雲%王城寬%黃英%畢正生%葉尤鬆
당동홍%한원원%라운%왕성관%황영%필정생%협우송
猕猴%XDH/XO基因片段%RT-PCR%肝脏组织%测序
獼猴%XDH/XO基因片段%RT-PCR%肝髒組織%測序
미후%XDH/XO기인편단%RT-PCR%간장조직%측서
RT-PCR扩增猕猴黄嘌呤脱氢酶/氧化酶(XDH/XO)基因片段,为进一步开展相关研究提供实验资料.方法 提取猕猴新鲜肝脏组织总RNA,用RT-PCR二步法进行XDH/XO基因片段扩增,对获得的目的片段进行序列测定,与GenBank上发表的人类(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、家鼠(Rattus norvegicus)、野猪(Sus scrofa)等物种XDH/XO基因进行该序列同源性比对分析,DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列,InterProScan 及SWISS-MODEL工具进行XDH/XO的编码蛋白结构域及功能预测及三维结构构建.结果 RT-PCR 产物电泳检测得到了与设计大小相一致的目的条带,序列测定共测到683个核苷酸,DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列包括了1个编码53个氨基酸的开放阅读框(ORF),通过该软件包中Multiple alignment对目的基因片段的核苷酸序列与NCBI报道的人类、小鼠、家鼠、野猪XDH/XO基因mRNA互补的cDNA核苷酸序列同源性进行同源性比较分析,结果显示所扩增得到的目的片段与人类同源性最高,为95.6%,与小鼠、家鼠、野猪的同源性分别为85.2%、84.3%、86.1%,说明获得的基因片段是猕猴的XDH/XO基因片段,且该基因在物种间具有较高的相似性.生物信息学预测该段XDH/XO编码蛋白含有醛氧化/脱氢酶的钼喋呤结合点结构域及黄嘌呤脱氢酶结构域.结论 在体外成功扩增出猕猴XDH/XO基因片段,为进一步开展高尿酸血症致病机理研究,抗高尿酸血症新药研发奠定工作基础.
RT-PCR擴增獼猴黃嘌呤脫氫酶/氧化酶(XDH/XO)基因片段,為進一步開展相關研究提供實驗資料.方法 提取獼猴新鮮肝髒組織總RNA,用RT-PCR二步法進行XDH/XO基因片段擴增,對穫得的目的片段進行序列測定,與GenBank上髮錶的人類(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、傢鼠(Rattus norvegicus)、野豬(Sus scrofa)等物種XDH/XO基因進行該序列同源性比對分析,DNAMAN軟件預測該段覈苷痠的氨基痠序列,InterProScan 及SWISS-MODEL工具進行XDH/XO的編碼蛋白結構域及功能預測及三維結構構建.結果 RT-PCR 產物電泳檢測得到瞭與設計大小相一緻的目的條帶,序列測定共測到683箇覈苷痠,DNAMAN軟件預測該段覈苷痠的氨基痠序列包括瞭1箇編碼53箇氨基痠的開放閱讀框(ORF),通過該軟件包中Multiple alignment對目的基因片段的覈苷痠序列與NCBI報道的人類、小鼠、傢鼠、野豬XDH/XO基因mRNA互補的cDNA覈苷痠序列同源性進行同源性比較分析,結果顯示所擴增得到的目的片段與人類同源性最高,為95.6%,與小鼠、傢鼠、野豬的同源性分彆為85.2%、84.3%、86.1%,說明穫得的基因片段是獼猴的XDH/XO基因片段,且該基因在物種間具有較高的相似性.生物信息學預測該段XDH/XO編碼蛋白含有醛氧化/脫氫酶的鉬喋呤結閤點結構域及黃嘌呤脫氫酶結構域.結論 在體外成功擴增齣獼猴XDH/XO基因片段,為進一步開展高尿痠血癥緻病機理研究,抗高尿痠血癥新藥研髮奠定工作基礎.
RT-PCR확증미후황표령탈경매/양화매(XDH/XO)기인편단,위진일보개전상관연구제공실험자료.방법 제취미후신선간장조직총RNA,용RT-PCR이보법진행XDH/XO기인편단확증,대획득적목적편단진행서렬측정,여GenBank상발표적인류(Homo sapiens)、소서(Mus musculus)、가서(Rattus norvegicus)、야저(Sus scrofa)등물충XDH/XO기인진행해서렬동원성비대분석,DNAMAN연건예측해단핵감산적안기산서렬,InterProScan 급SWISS-MODEL공구진행XDH/XO적편마단백결구역급공능예측급삼유결구구건.결과 RT-PCR 산물전영검측득도료여설계대소상일치적목적조대,서렬측정공측도683개핵감산,DNAMAN연건예측해단핵감산적안기산서렬포괄료1개편마53개안기산적개방열독광(ORF),통과해연건포중Multiple alignment대목적기인편단적핵감산서렬여NCBI보도적인류、소서、가서、야저XDH/XO기인mRNA호보적cDNA핵감산서렬동원성진행동원성비교분석,결과현시소확증득도적목적편단여인류동원성최고,위95.6%,여소서、가서、야저적동원성분별위85.2%、84.3%、86.1%,설명획득적기인편단시미후적XDH/XO기인편단,차해기인재물충간구유교고적상사성.생물신식학예측해단XDH/XO편마단백함유철양화/탈경매적목첩령결합점결구역급황표령탈경매결구역.결론 재체외성공확증출미후XDH/XO기인편단,위진일보개전고뇨산혈증치병궤리연구,항고뇨산혈증신약연발전정공작기출.
