西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2013年
6期
768-772
,共5页
王亚文%刘正稳%张琳%冯艾%王威%王全颖%杨广笑%惠凌云
王亞文%劉正穩%張琳%馮艾%王威%王全穎%楊廣笑%惠凌雲
왕아문%류정은%장림%풍애%왕위%왕전영%양엄소%혜릉운
鸭乙肝病毒%核心蛋白%单克隆抗体%细胞克隆
鴨乙肝病毒%覈心蛋白%單剋隆抗體%細胞剋隆
압을간병독%핵심단백%단극륭항체%세포극륭
目的 制备抗鸭乙肝病毒core蛋白的单克隆抗体并进行鉴定.方法 PCR扩增鸭乙肝病毒(DHBV) core基因片段,构建表达载体pET28a(+)/DHBV core.转化诱导表达融合蛋白,用Ni2+亲和柱纯化目的 蛋白.免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选,采用有限稀释法筛选单克隆杂交瘤细胞并进行细胞克隆.体内诱生法大量制备单克隆抗体,进行抗体的特异性、效价和亚型的鉴定.结果 成功构建表达载体pET28a(+)/DHBV core,并表达DHBV core蛋白.获得2株稳定分泌抗DHBV core抗体的杂交瘤细胞株,分别为2D7和5G10,细胞培养液抗体效价为1:400和1:800.选择5G10细胞株制备单克隆抗体,小鼠腹水抗体效价可达1:320000.鸭肝组织免疫组化结果显示,DHBV病毒载量>1010copies/mg的肝组织中DHBV core蛋白的表达明显高于病毒载量<105 copies/mg的肝组织,而未感染DHBV的鸭肝细胞内不表达DHBV core蛋白.亚型鉴定结果为IgG2a κ链.结论 制备并获得了抗DHBV core蛋白的单克隆抗体,为DHBV core蛋白的功能研究、诊断试剂的研制与抗病毒治疗研究奠定了基础.
目的 製備抗鴨乙肝病毒core蛋白的單剋隆抗體併進行鑒定.方法 PCR擴增鴨乙肝病毒(DHBV) core基因片段,構建錶達載體pET28a(+)/DHBV core.轉化誘導錶達融閤蛋白,用Ni2+親和柱純化目的 蛋白.免疫Balb/c小鼠,取脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融閤,ELISA篩選,採用有限稀釋法篩選單剋隆雜交瘤細胞併進行細胞剋隆.體內誘生法大量製備單剋隆抗體,進行抗體的特異性、效價和亞型的鑒定.結果 成功構建錶達載體pET28a(+)/DHBV core,併錶達DHBV core蛋白.穫得2株穩定分泌抗DHBV core抗體的雜交瘤細胞株,分彆為2D7和5G10,細胞培養液抗體效價為1:400和1:800.選擇5G10細胞株製備單剋隆抗體,小鼠腹水抗體效價可達1:320000.鴨肝組織免疫組化結果顯示,DHBV病毒載量>1010copies/mg的肝組織中DHBV core蛋白的錶達明顯高于病毒載量<105 copies/mg的肝組織,而未感染DHBV的鴨肝細胞內不錶達DHBV core蛋白.亞型鑒定結果為IgG2a κ鏈.結論 製備併穫得瞭抗DHBV core蛋白的單剋隆抗體,為DHBV core蛋白的功能研究、診斷試劑的研製與抗病毒治療研究奠定瞭基礎.
목적 제비항압을간병독core단백적단극륭항체병진행감정.방법 PCR확증압을간병독(DHBV) core기인편단,구건표체재체pET28a(+)/DHBV core.전화유도표체융합단백,용Ni2+친화주순화목적 단백.면역Balb/c소서,취비세포여SP2/0골수류세포융합,ELISA사선,채용유한희석법사선단극륭잡교류세포병진행세포극륭.체내유생법대량제비단극륭항체,진행항체적특이성、효개화아형적감정.결과 성공구건표체재체pET28a(+)/DHBV core,병표체DHBV core단백.획득2주은정분비항DHBV core항체적잡교류세포주,분별위2D7화5G10,세포배양액항체효개위1:400화1:800.선택5G10세포주제비단극륭항체,소서복수항체효개가체1:320000.압간조직면역조화결과현시,DHBV병독재량>1010copies/mg적간조직중DHBV core단백적표체명현고우병독재량<105 copies/mg적간조직,이미감염DHBV적압간세포내불표체DHBV core단백.아형감정결과위IgG2a κ련.결론 제비병획득료항DHBV core단백적단극륭항체,위DHBV core단백적공능연구、진단시제적연제여항병독치료연구전정료기출.
