中国中西医结合急救杂志
中國中西醫結閤急救雜誌
중국중서의결합급구잡지
INTEGRATED TRADITIONAL CHINESE AND WESTERN MEDICINE IN PRACTICE OF CRITICAL CARE MEDICINE
2013年
4期
201-204
,共4页
卜婧%张永亮%李灵芝%龚海英%李建宇
蔔婧%張永亮%李靈芝%龔海英%李建宇
복청%장영량%리령지%공해영%리건우
蕨麻正丁醇提取物%神经元%缺氧损伤%一氧化氮%神经型一氧化氮合酶
蕨痳正丁醇提取物%神經元%缺氧損傷%一氧化氮%神經型一氧化氮閤酶
궐마정정순제취물%신경원%결양손상%일양화담%신경형일양화담합매
Potentilla anserina L. N-butanol extract%Neuron%Hypoxia injury%Nitrogen monoxidum%Neuronal nitric oxide synthetase
目的研究蕨麻正丁醇提取物（NP）对大鼠海马神经元急性缺氧所致一氧化氮（NO）生成的抑制作用。方法建立体外原代培养海马神经元缺氧损伤实验模型，随机分为空白对照组、缺氧模型组、尼莫地平组（2μmol/L）及NP高（250.0 mg/L）、中（62.5 mg/L）、低（15.6 mg/L）剂量组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测海马神经元细胞活性，同时检测其一氧化氮（NO）含量；用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）分别检测各组神经型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA及蛋白的表达，用免疫细胞化学染色法检测nNOS阳性率。结果与空白对照组比较，缺氧模型组神经元细胞活性〔吸光度（A）值〕明显降低（0.0826±0.0095比0.3315±0.0105），NO含量（μmol/g：0.0509±0.0027比0.0291±0.0032）、nNOS mRNA表达（A值：0.1463±0.0081比0.0801±0.0058）、nNOS阳性率〔（74.4238±3.9423）%比（28.3714±4.1361）%〕及nNOS蛋白表达（A值：1.9130±0.0471比0.5068±0.0368）均明显升高（均P＜0.01）。与缺氧模型组比较，各药物组缺氧神经元细胞活性均增加，NO含量、nNOS mRNA及蛋白表达均降低，以高剂量组变化更显著〔神经元细胞活性：0.1681±0.0118，NO含量：0.0319±0.0044，nNOS mRNA表达：0.0648±0.0032， nNOS阳性率：（40.1240±6.4900）%，nNOS蛋白表达：1.3924±0.0621，均P＜0.01〕；而NP低剂量组与模型组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 NP能减轻缺氧对体外培养大鼠海马神经元的损伤，其机制可能为有效抑制nNOS合成NO的过度升高。
目的研究蕨痳正丁醇提取物（NP）對大鼠海馬神經元急性缺氧所緻一氧化氮（NO）生成的抑製作用。方法建立體外原代培養海馬神經元缺氧損傷實驗模型，隨機分為空白對照組、缺氧模型組、尼莫地平組（2μmol/L）及NP高（250.0 mg/L）、中（62.5 mg/L）、低（15.6 mg/L）劑量組。用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法檢測海馬神經元細胞活性，同時檢測其一氧化氮（NO）含量；用半定量逆轉錄-聚閤酶鏈反應（RT-PCR）、蛋白質免疫印跡試驗（Western blotting）分彆檢測各組神經型一氧化氮閤酶（nNOS）mRNA及蛋白的錶達，用免疫細胞化學染色法檢測nNOS暘性率。結果與空白對照組比較，缺氧模型組神經元細胞活性〔吸光度（A）值〕明顯降低（0.0826±0.0095比0.3315±0.0105），NO含量（μmol/g：0.0509±0.0027比0.0291±0.0032）、nNOS mRNA錶達（A值：0.1463±0.0081比0.0801±0.0058）、nNOS暘性率〔（74.4238±3.9423）%比（28.3714±4.1361）%〕及nNOS蛋白錶達（A值：1.9130±0.0471比0.5068±0.0368）均明顯升高（均P＜0.01）。與缺氧模型組比較，各藥物組缺氧神經元細胞活性均增加，NO含量、nNOS mRNA及蛋白錶達均降低，以高劑量組變化更顯著〔神經元細胞活性：0.1681±0.0118，NO含量：0.0319±0.0044，nNOS mRNA錶達：0.0648±0.0032， nNOS暘性率：（40.1240±6.4900）%，nNOS蛋白錶達：1.3924±0.0621，均P＜0.01〕；而NP低劑量組與模型組比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。結論 NP能減輕缺氧對體外培養大鼠海馬神經元的損傷，其機製可能為有效抑製nNOS閤成NO的過度升高。
목적연구궐마정정순제취물（NP）대대서해마신경원급성결양소치일양화담（NO）생성적억제작용。방법건입체외원대배양해마신경원결양손상실험모형，수궤분위공백대조조、결양모형조、니막지평조（2μmol/L）급NP고（250.0 mg/L）、중（62.5 mg/L）、저（15.6 mg/L）제량조。용사갑기우담서염（MTT）비색법검측해마신경원세포활성，동시검측기일양화담（NO）함량；용반정량역전록-취합매련반응（RT-PCR）、단백질면역인적시험（Western blotting）분별검측각조신경형일양화담합매（nNOS）mRNA급단백적표체，용면역세포화학염색법검측nNOS양성솔。결과여공백대조조비교，결양모형조신경원세포활성〔흡광도（A）치〕명현강저（0.0826±0.0095비0.3315±0.0105），NO함량（μmol/g：0.0509±0.0027비0.0291±0.0032）、nNOS mRNA표체（A치：0.1463±0.0081비0.0801±0.0058）、nNOS양성솔〔（74.4238±3.9423）%비（28.3714±4.1361）%〕급nNOS단백표체（A치：1.9130±0.0471비0.5068±0.0368）균명현승고（균P＜0.01）。여결양모형조비교，각약물조결양신경원세포활성균증가，NO함량、nNOS mRNA급단백표체균강저，이고제량조변화경현저〔신경원세포활성：0.1681±0.0118，NO함량：0.0319±0.0044，nNOS mRNA표체：0.0648±0.0032， nNOS양성솔：（40.1240±6.4900）%，nNOS단백표체：1.3924±0.0621，균P＜0.01〕；이NP저제량조여모형조비교차이균무통계학의의（균P＞0.05）。결론 NP능감경결양대체외배양대서해마신경원적손상，기궤제가능위유효억제nNOS합성NO적과도승고。
Objective To study in vitro the inhibitory effects and mechanisms of N-butanol extract of Potentilla anserine L.(NP)against hypoxia-induced nitric oxide(NO)in hippocampus neuron of rats. Methods The models of hippocampus neurons hypoxia injury of Sprague-Dawley(SD)neonatal rats were cultured in vitro. The cultured hippocampus neurons were divided randomly into blank control group, hypoxia injury model group, nimodipine group(2 μmol/L)and NP high(250.0 mg/L),middle(62.5 mg/L),low(15.6 mg/L)dose groups. The activities of hippocampus neurons were examined by methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)assay,and meanwhile their contents of nitrogen monoxidum(NO)were detected. Half quantity reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR)and Western blotting were used to detect neuronal nitric oxide synthetase(nNOS)mRNA and protein expression levels respectively in each group,immunocytochemistry stain was used to detect protein positive rate. Results Compared with blank control group,the activity of neuron〔absorbance(A)value〕was significantly decreased(0.0826±0.0095 vs. 0.3315±0.0105),content of NO(μmol/g:0.0509±0.0027 vs. 0.0291±0.0032), the expression levels of nNOS mRNA (0.1463±0.0081 vs. 0.0801±0.0058), the positive rate of nNOS〔(74.4238±3.9423)%vs.(28.3714±4.1361)%〕,the expression levels of nNOS protein(A value:1.9130±0.0471 vs. 0.5068±0.0368)were all significantly increased in the hypoxia injury model group(all P<0.01). Compared with hypoxia injury model,the activity of neuron was increased,contents of NO,the expression levels of nNOS mRNA,the positive rate of nNOS,the express levels of nNOS protein were decreased in each medicine group,especially prominent in the NP high concentration group〔the activity of neuron:0.1681±0.0118,contents of NO:0.0319±0.0044,nNOS mRNA:0.0648±0.0032,nNOS positive rate:(40.1240±6.4900)%,nNOS protein:1.3924±0.0621,all P<0.01〕. There were no statistical significant differences between the NP low concentration group and model group(all P>0.05). Conclusions NP can ameliorate the injury of rat hippocampus neurons induced by hypoxia in vitro. The possible mechanisms might be related to the effective inhibition of the synthesis of nNOS and NO excessive generation.
